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Purification and Cellular Localization of Extracellular Nuclease of Serratia marcescens Expressed in Escherichia coli
김외연, 이훈실, 서숙재, 조무제, 이상열, 김재원, Kim. Woe-Yeon, Lee. Hoon-Sil, Suh. Sook-Jae, Cho. Moo-Je, Lee. Sang-Yeol, Kim. Jae-Won 한국미생물학회 미생물학회지 8 Pages
한국미생물학회 미생물학회지 1994, Vol.32 No.2 147-154 (8 pages)
Matrex green gel과 heparin agarose gel column chromatography법으로 약 50배 정제한 효소는 분자량이 29KDa였으며, 전기영동 상에서 단일 띠를 보였다. 이 단백질을 이용하여 polyclonal antibody를 만들고, 면역조직화학법으로 세포내의 분포를 조사하였다. Nuclease는 주로 세포막에 존재하였고, 이를 토대로 효소가 세포질에서 합성된 후 세포막으로 빠르게 이동함을 알 수 있었다. 이 결과는 세포의 막분획에서 효소의 활성의 대부분이 회수되며, 면역블럿 방법으로 효소의 대부분이 세포막에서 검출된다는 결과와 일치하였다. -
Neurospora crassa의 L-Ascorbic Acid 생산효소의 순수 분리 및 이의 특성에 관한 연구
김인실, 이연희, Kim. In-Sil, Lee. Yeon-Hee 한국미생물학회 미생물학회지 7 Pages
한국미생물학회 미생물학회지 1994, Vol.32 No.2 132-138 (7 pages)
Reactive yellow 3-agarose dye column 크로마토그래피 등의 방법들이 이용되었다. 그 결과 2.1%의 수율에 specific activity가 239.6배 증가되었다. Sephacryl S-200 gel filtration을 통해 본 이 효소의 분자량은 약 150,000 dalton 이었다. 그리고 SDS-polyacrylamide gel electrophoresis를 실시하였을 때는 분자량이 약 75,000 dalton이었으므로 이 효소는 동일한 단위체로 구성된 이합체로 생각되었다. 이 효소의 최적 반은 pH는 9.0으로 나타났으며 D-glucono-${gamma}$-lactone을 기질로 하였을때의 $K_m$값은 0.073이었다. -
Pichia pastoris에서 Zobellia galactanivorans 유래 재조합 $eta$-Agarase의 고효율 분비생산
석지환, 박희균, 이상현, 남수완, 전숭종, 김종현, 김연희, Seok. Ji-Hwan, Park. Hee-Gyun, Lee. Sang-Hyeon, Nam. Soo-Wan, Jeon. Sung-Jong, Kim. Jong-Hyun, Kim. Yeon-H 한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 6 Pages
한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 2010, Vol.38 No.1 40-45 (6 pages)
Agarose의 $eta$-1,4결함을 분해하는 Zobellia galactanivorans 유래의 $eta$-agarase 유전자(agaB)는 클로닝 되었고, AOX1(alcohol oxidase 1, methanol inducible) promoter 하류에 Saccharomyces cerevisiae mating factor alpha-1 secretion signal($MF{alpha}1$)를 연결하여 $MF{alpha}1$-AgaB를 구축하였다. 구축된 plasmid pPIC-AgaB(9 kb)를 Pichia pastoris genome에 HIS4 gene 위치에 integration하였고, colony PCR을 통해 확인하였다. Methanol 첨가 배지에서 자란 형질전환체는 iodine solution의 첨가에 의해 red halos를... -
대장균을 이용한 Akt/PKB Protein Kinase의 발현 및 활성화
이재학, Lee. Jae-Hag 한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 5 Pages
한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 2009, Vol.37 No.2 105-109 (5 pages)
human Akt/PKB 단백질을 발현시켰다. 대장균에서 대량 발현된 Akt는 일반적인 조건에서는 inclusion body를 형성하였다. 배양온도 $27^{circ}C$에서 0.01-0.09 mM IPTG로 발현 유도 시 발현된 human Akt/PKB 단백질 상당 부분이 가용화 되었다. 발현된 Akt kinase를 $Ni^{2+}$-NTA agarose column으로 정제하고, anti-Akt antibody를 이용하여 정제된 단백질이 Akt kinase 임을 확인하였다. 정제된 human Akt/PKB 단백질은 세포추출물에 존재하는 인산화 단백질을 이용하여 in vitro에서 인산화 되었으며, 인산화된 활성형 human Akt/PKB... -
Saccharomyces cerevisiae에서 Pseudoalteromonas carageenovora 유래 Arylsulfatase 유전자의 표층 발현
조은수, 김현진, 정소아, 김정환, 김연희, 남수완, Cho. Eun-Soo, Kim. Hyun-Jin, Jung. So-A, Kim. Jeong-Hwan, Kim. Yeon-Hee, Nam. Soo-Wan 한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 6 Pages
한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 2009, Vol.37 No.4 355-360 (6 pages)
S. cerevisiae의 세포표면에서 발현된 재조합 arylsulfatase로 제조된 agarose를 agar와 시판용 agarose와 함께 ${lambda}DNA$ HindIII marker를 사용하여 DNA 전기영동 성능을 비교 실험한 결과, agar보다는 재조합 arylsulfatase 처리로 제조한 agarose가 이동성이나 분리능에서 우수하였으며, 시판용 agarose와 비교하여 이동성이나 분리능이 유사한 결과를 확인할 수 있었다. 본 연구의 결과, 효모 S. cerevisiae의 세포표면에서 발현된 재조합 arylsulfatase 효소를 이용하여 한천으로부터 전기영동용 고순도 친환경적인 agarose... -
Streptomyces longwoodensis로부터 Autoregulator Receptor Protein 유전자의 클로닝 및 특성
여수환, 이성봉, 김현수, Yeo. Soo-Hwan, Lee. Sung-Bong, Kim. Hyun-Soo 한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 10 Pages
한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 2005, Vol.33 No.2 96-105 (10 pages)
PCR을 수행하였다. 예상되는 100 bp 크기의 단편을 pUC19 vector에 ligation하여 E. coli $DH5{alpha}$에 transformation한 후, plasmid를 분리하여 BamHI을 처리하여 $2\%$ agarose gel에 전기영동한 결과, pUC19 외에 receptor gene PCR product가 100 bp 위치에 존재하는 것을 확인하였다. 형질전환된 plasmid로 PCR을 수행한 후, 염기배열을 결정하여 분석한 결과, Streptomyces sp. 유래의 receptor gene의 일부분임이 확인되었다. 따라서 S. longwoodensis IFO 14251에는 lysocellin 생산에 관여한다고 추정되는 autoregulator... -
Saccharopolyspora erythraea IFO 13426으로부터 Autoregulator Receptor Protein Gene의 Cloning
김현수, 이경화, 조재만 한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 7 Pages
한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 2003, Vol.31 No.2 117-123 (7 pages)
agarose gel에 전기영동한 결과, pUC19 (2.7kbp)외에 receptor gene PCR 산물이 120bp위치에 존재하는 것을 확인하였다. 형질전환된 plasmid로 PCR을 수행하여 염기배열을 결정한 후 해석한 결과 Streptomyces sp. 유래의 receptor gene과 유사함을 확인하였다. 따라서 Saccha. erythraea IFO 13426에는 항생물질인 erythromycin의 생산에 관여한다고 추정되는 autoregulator receptor protein을 코드하는 유전자가 존재할 것으로 예상되어 120 bp의 PCR product를 probe로 이용하여 Southern 및 colony hybridization을 통하여 3.2 kbp의... -
Bunker-C유 집식배양으로부터 해양세균 Plasmid의 분포
Park. In-Sick, Park. Jung-Youn, Jin. Deuk-Hee, Hong. Yong-Ki 한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 5 Pages
한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 1988, Vol.16 No.4 270-274 (5 pages)
및 충무, 울산항구의 해수를 균원으로 접종하여 enrichment culture시켰다. 이와 같은 혼합배양 해양세균들의 plasmid DNA분포를 agarose gel 전기영동상에서 조사하여 보았다. 우선 오염되지 않은 해수로부터 분리한 세균들의 Plasmid 분포(22%)와 만성적으로 유류오염이 예상되는 각 항구의 세균 plasmid 분포(25%)에는 조금 차이는 있었으며 enrichment culture중에는 29%정도로서 plasmid 분포비율이 증가하였다. 각종 탄화수소 화합물들에 성장하는 세균중 약33%는 plasmid룰 함유하고 있었으며, 또 약 62%정도는 Gram 음성균이었다.... -
사람 선유아세포 인터페론(Hu IFN-$eta$)에 대한 단 Clone성 항체생산세포의 조작과 그 성질에 관한 연구
김현수, 현형환, 최경희, 문홍모, 유무영 한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 5 Pages
한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 1986, Vol.14 No.3 219-223 (5 pages)
mouse의 복강과 꼬리정맥을 통하여 HuIFN-$eta$를 면역화시키고 그 비장세포(spleen cells) 와 NS-O 세포주를 세포융합 시켰다. 융합된 1300 hybrids를 ELISA방법으로 선별하고 soft agarose 방법과 limiting dilution방법으로 subcloning하여 높은 항체를 생성하는 것으로 판명된 11 hybrids를 재선별 하였다. 재선별된 11 hybrids 각각의 항체형 (Ig type)을 조사하고 최종 Protein A-sepharose와 친화성이 높은 IgG 2a/형의 clone # 4-1-19와 clone # 551-4-1을 선별하여 배양된 세포를 각각 nude(nu/nu) mouse 및 BALB/c mouse... -
Hygromycin내성 Tetrahymena thermophila의 17S-Ribosomal RNA유전자의 Cloning
홍용기 한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 5 Pages
한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 1986, Vol.14 No.2 133-137 (5 pages)
17S-rDNA구조 및 hygromycin 내성 기구에 대한 연구의 일부로서 hygromycin 내성변이주 hmr3의 17S-rDNA를 대장균의 vector pBR 322에 cloning하였다. 우선 rDNA는 hot phenol-cresol 용액으로 추출하여 제한효소 Hind III 처리로서 약 2.2kbp의 17S-rDNA를 agarose 전기영동상에서 분리하였다. 이를 pBR 322에 cloning하여 wild type의 17S-rDNA probe와 colony hybridization시켜 선별하였다. 그중 5-19 균주의 recombinant plasmid로부터 17S-rDNA 의 전사 orientation위치가 pBR322의 tetracyline내성 유전자 쪽으로 삽입되어 있는...