흰쥐 말초혈액에서 얻은 T 림프구를 아드레날린성 β-수용체 효현제 및 concanavalin A(Con-A)로 자극해 다음과 같은 결과를 얻었다. 자극이 없는 상태에서의 주 인산화 단백은 분자량 44kD, 등전점 6.8의 단백이었으며 효현제로 자극시키면 분자량 44kD, 등전점 6.3의 단백이 새로이 인산화되어 나타났다. 이 분자량 44kD, 등전점 6.3의 단백은 forskolin에 의해 역시 인산화되며 A-kinase 억제제인 H-8을 전처치하면 인산화의 억제가 나타났다. 또한 Con-A로 자극시키면 44 kD/pI 6.3 단백의 인산화가 증가되었으며 이 인산화의 증가는 CaM kinase 억제제인 W-7 전처치에 의해 억제되었다. H-7은 분자량 44 kD, 등전점 6.8 단백의 인산화를 감소 시켰다. 이상의 결과로 분자량 44 kD 등전점 6.3의 단백은 A-kinase와 CaM kinase 모두에 의해 인산화 되는 기질단백으로서 tryptic peptide map상에서 44 kD/pI 6.8 단백과 44 kD/pI 6.3 단백은 서로 다른 단백임을 알 수 있었다.
Using T-lymphocytes obtained from rat peripheral blood, we found that the 44kD/pI6.8 protein was the major phosphoprotein of T-lymphocytes under basal condition, and that the 44kD/pI6.3 protein was a new phosphoprotein appeared in T-lymphocytes stimulated with β-agonist. The phosphorylation of the 44kD/pI6.3 protein was also induced by forskolin but inhibited by H-8 pretreatment. To clarify the character of the 44kD/pI6.3 protein, we used Con-A and kinase inhibitors, H-7 and W-7. Con-A stimulation induced phosphorylation of 44kD/pI 6.3 protein but that was inhibited by W-7 pretreatment. The phosphorytation of 44kD/pI6.3 protein was not induced by the PKC activator, PMA. Instead, the phosphorylation of 44kD/pI6.8 protein was reduced by H-7, a PKC inhibitor. From the above results,it can be concluded that the 44kD/pI6.3 protein can be a common substrate for A-kinase and CaM kinase. The two dimensional tryptic peptide mapping revealed that the 44kD/pI6.8 and 44kD/pI6.3 proteins are different.
