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High Yield Bacterial Expression and Purification of Active Cytochrome P450 p-coumarate-3-hydroxylase (C3H), the Arabidopsis Membrane Protein
양희정, 김완연, 윤영주, 윤지원, 권태우, 윤혜숙, 윤부현, Yang. Hee-Jung, Kim. Wan-Yeon, Yun. Young-Ju, Yoon. Ji-Won, Kwon. Tae-Woo, Youn. Hye-Sook, Youn. Bu-Hyun 한국생명과학회 생명과학회지 8 Pages
한국생명과학회 생명과학회지 2009, Vol.19 No.8 1039-1046 (8 pages)
다양한 천연물의 합성대사에 관여하는 식물 cytochrome P450 (P450s)은 그 기능적 다양성에도 불구하고, 이들 효소의 광범위한 기질 특이성을 설명해 줄 수 있는 구조분석에 대해서는 충분한 연구가 이루어지지 못하고 있는 실정이다. 식물 p-coumarate 3-hydroxylase (C3H)에 의해 매개되는 효소 반응은 lignin 과 다양한 phenylpropanoid 부산물들의 생합성에 매우 중요한 것으로 여겨지지만, 막 단백질인 C3H의 발현 및 정제가 효과적으로 이루어지지 못하여, 활성을 측정하기 위한 분석방법이 체계화 되지 못하고 있다. C3H의... -
Identification of catalytic acidic residues of levan fructotransferase from Microbacterium sp. AL-210
성희경, 문금옥, 최기원, 최경화, 황경주, 김묘정, 차재호, Sung. Hee-Kyung, Moon. Keum-Ok, Choi. Ki-Won, Choi. Kyung-Hwa, Hwang. Kyung-Ju, Kim. Myo-Jung, Cha. Jae-Ho 한국생명과학회 생명과학회지 6 Pages
한국생명과학회 생명과학회지 2007, Vol.17 No.1 6-11 (6 pages)
당 분해효소의 family 32 (GH32)에 속하는 $eta-fructofuranosidase$는 3차구조를 근거로 볼 때 W(L/M)(C/N)DP(Q/N), FRDPK, 그리고 ECP(D/G) 부위를 포함하는 세 군데의 보전적인 영역을 가지고 있다. 이러한 $eta-fructofuranosidase$ family에 속하는 Microbacterium sp. AL-210 유래 levan fructotransferase (LFTase)의 보전적인 산성 아미노산들의 역할이 특정위치 돌연변이법으로 검사되었다. 각각의 돌연변이체는 대장균인 E. coli BL21 (DE3)균주에서 발현되어 대량 생산되었고, 금속 친화 크로마토그래피법과 FPLC법으로 순수... -
Cloning and Identification of Essential Residues for Thermostable β-glucosidase (BgIB) from Thermotoga maritima
홍수영, 조계만, 김용희, 홍선주, 조수정, 조용운, 김훈, 윤한대, Hong. Su-Young, Cho. Kye-Man, Kim. Yong-Hee, Hong. Sun-Joo, Cho. Soo-Jeong, Cho. Yong-Un, Kim. Hoon, Yun 한국생명과학회 생명과학회지 10 Pages
한국생명과학회 생명과학회지 2006, Vol.16 No.7 1148-1157 (10 pages)
초고온성 세균인 Thermotoga maritima로부터 ${eta}-glucosidase$ 유전자를 클로닝한 후 대장균 숙주에서 발현시켰다. 이 효소는 salicin, arbutin, $_pNPG$과 같은 탄소원의 ${eta}$-글루코시드 결합을 가수분해하였다. 721개의 아미노산을 암호화하는 2,166 bp의 DNA 염기서열로된 유전자이였다. 다른 ${eta}-glucosidase$ 효소들과 단백질 유사성을 비교한 결과 glycosyl hydrolase family 3에 속하였으며 MUG-nondenaturing PAGE와 SDS-PAGE에 의해 확인된 단백질의 크기는 약 81 kDa이었다. 효소활성은 pH 7.0, $80^{circ}C$에서... -
Mutations in the PPE Genes that Confer Resistance to a Nitroimidazopyran Drug on Mycobacterium bovis Strains
배영민, Bae. Young-Min, Daniels. Lacy 한국생명과학회 생명과학회지 4 Pages
한국생명과학회 생명과학회지 2005, Vol.15 No.2 182-185 (4 pages)
IS1096 transposon을 사용하여 결핵균군에 작용하는 항생제인 PA-824에 내성을 나타내는 Mycobacterium bovis BCG의 돌연변이 균주를 얻고자 하였고, 그 결과 24종류의 서로 다른 돌연변이 균주를 얻을 수 있었다. Transposon이 insertion된 부위를 알아내기 위해서 각각의 돌연변이 균주로 inverse PCR을 수행하였고, PPE 유전자를 포함한 여러 가지 부위에 insertion된 transposon의 위치를 확인할 수 있었다. PPE 유전자에 insertion돌연변이가 발생한 5개 균주의 세포 추출물을 HPLC로 분석한 결과, 3개에서는 야생균주에서 관찰되는... -
Mycobacterium bovis BCG Rv2435c 유전자의 기능에 대한 연구
이승실, 배영민, Lee. Seung-Sil, Bae. Young-Min 한국생명과학회 생명과학회지 8 Pages
한국생명과학회 생명과학회지 2005, Vol.15 No.3 415-422 (8 pages)
Mycobacterium hovis BCG 균주에 transposon을 사용하여 mutagenesis를 수행함으로써 mutant library를 제조하였다. 이 mutant library를 screening하여 항결핵제인 PA-824에 내성을 갖는 mutant들을 얻었고, M. bovis wild type에서는 정상적으로 생성되는 coenzyme $F_{420}$이 대부분의 이들 mutant들에서는 생성되지 않는다는 것을 알게 되었다. 세포 추출액을 HPLC로 분석해본 결과, 그 중에서 한 mutant는 $F_{420}$은 생성하지 않으나 그 전구물질인 F0는 생성하고 있음이 밝혀졌다. 따라서 이 mutant 에서는 $F_{420}$생합성... -
Identification of Genes Involved in Decolorization of Crystal Violet and Malachite Green in Citrobacter sp.
Lee. Young-Mi, Jang. Moon-Sun, Kim. Seok-Jo, Park. Yong-Lark, Cho. Young-Su, Lee. Young-Choon 한국생명과학회 생명과학회지 5 Pages
한국생명과학회 생명과학회지 2004, Vol.14 No.1 21-25 (5 pages)
Crystal violet와 malachite green색소 분해에 관여하는 유전자들을 규명하기 위하여 색소분해능을 가진 Citrobacter sp.의 염색체 DNA속에의 transposon 도입에 의해 생성된 무작위 변이주들이 분리되었다. 이들 변이 주들로부터 두가지 색소분해능을 소실한 14개의 변이주들이 선별되었고, 이들로부터 염색체 DNA를 분리하여 EcoRl으로 절단한 후 Tn5 단편을 probe로하여 Southern hybridization을 행한 결과, 염색체 DNA상의 각각 다른 부위에 Transposon이 Single 삽입된 5개의 변이주 (Cmg2, Cmg6, Cmg8, Cmgll, Cmg12)가 최종적으로... -
Diepoxybutane에 의해 유도된 애기장대 엽록체 돌연변이체의 분석
윤용휘, 이정훈, 박해진, 강용원, 이경민, 신동현, 이인중, 김학윤, 김달웅 한국생명과학회 생명과학회지 8 Pages
한국생명과학회 생명과학회지 2002, Vol.12 No.4 399-406 (8 pages)
본 연구에서는 DEB를 애기장대 종자에 처리하여 엽록체 발달에 관련된 돌연변이체들을 분리하였다. 이들은 각각 그 특징에 따라 iml, gev, yev로 명명하였으며 iml은 잎에 얼룩무늬를 나타내는 돌연변이체이며, gev는 엽맥에만 녹색을 나타내고 이외의 잎에서는 연한녹색을 나타내며, yev는 엽맥은 연한녹색을 나타내고 엽맥 이외의 잎에서는 녹색을 나타내었다. 주사 전자현미경을 이용하여 엽록체 상세구조를 관찰하여 본 결과 야생형 엽록체의 그라나 티라코이드의 모양은 규칙적인 배열하는 그라나가 쌓여 있었으나, iml, gev, yev... -
박테리오파아지 T7 의 기능에 관한 연구;복제단백질간의 단백질 상호작용
김학준, 김영태 한국생명과학회 생명과학회지 8 Pages
한국생명과학회 생명과학회지 1996, Vol.6 No.3 185-192 (8 pages)
박테리오파지 T7 gene 2.5 단백질은 single-stranded DNA 결합 단백질로 박태리오파지 T7의 DNA복제, 재조합, 및 수선에 필수적으로 요구된다. Gene 2.5 protein은 T7의 DNA 합성과 성장에 필수적인 단백질이다. Gene 2.5 Protein이 중요시 되는 이유는 이 단백질이 T7의 다른 복제 필수단백질인 T7의 다른 복제 필수단백질인 T7 DNA polymerase 와 gene 4 protein(helicase/primase)와 서로 상호작용할 것으로 제안되었기 때문이다. (Kim and Richardson, J. Biol. Chem., 1992;1994). 이 단백질의 단백질 상호작용을 가능하게 하는...