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Escherichia coli 리보핵산 내부분해효소 RNase E의 돌연변이체 선별 및 특성분석
신은경, 고하영, 김영민, 주세진, 이강석, Shin. Eun-Kyoung, Go. Ha-Young, Kim. Young-Min, Ju. Se-Jin, Lee. Kang-Seok 한국미생물학회 미생물학회지 6 Pages
한국미생물학회 미생물학회지 2007, Vol.43 No.4 325-330 (6 pages)
대장균의 필수적인 리보핵산 내부분해효소인 RNase E는세포내에서 여러 RNA의 분해와 가공과정에서 중요한 역할을 하며, 이 단백질의 효소활성부위를 포함하는 N-말단부위의 498 아미노산(N-Rne)만의 발현으로도 세포의 생장을 가능하게 한다. 이러한 RNase E의 특성을 활용하여 다양한 표현형을 가지는 N-Rne 돌연변이체들을 분리, 동정할 수 있는 효율적인 유전학적 시스템을 개발하였다. 이 시스템을 이용하여 얻어진 효소활성부위 돌연변이체들을 표현형으로 분류하여 분석한 결과, S1 도메인의 6번째 아미노산의 치환(I6T)을 가진... -
부산 도축장에서 분리된 광범위 베타 락탐 분해효소(Extended-Spectrum ${eta}$-Lactamase, ESBL)생성 장내세균의 형별분류
이훈구, Lee. Hun-Ku 한국미생물학회 미생물학회지 6 Pages
한국미생물학회 미생물학회지 2006, Vol.42 No.2 125-130 (6 pages)
연구에서는 도축장과 도축물에서 plasmid 매개성 광범위 ${eta}$-lactam (extended spectrum ${eta}$-lactamase) 분해효소를 생성하는 Klebsiella pneumoniae와Escherichia coli가 분리됨으로서 한국에서는 이들 균주가 임상범위를 넘어 자연계까지 확산되었음을 확인하였다. 디스크 확산 시험, 등전점 수치, 접합시험 등을 통하여 돼지의 분변으로부터 최종 10균주의 접합자를 얻었고 이들의 형별결정은 아미노산서열분석과 기준주와 대조등을 BCM Search Laucncher 및 NCBI blast를 통해 이루어졌다. 광범위 ${eta}$-lactam 유형은... -
Yeast내에서 MEK1 융합 단백질 발현 및 Lethal Factor 활성 검증
황혜현, 김정목, 최경재, 박해철, 한성환, 정회일, 구본성, 박준식, 윤문영, Hwang. Hye-Hyun, Kim. Joung-Mok, Choi. Kyoung-Jae, Park. Hae-Chul, Han. Sung-Hwan, Chung. Hoe-Il, 한국미생물학회 미생물학회지 4 Pages
한국미생물학회 미생물학회지 2006, Vol.42 No.3 195-198 (4 pages)
그 목적이 있다. 이를 위하여 LF의 절단 대상이 되는 기질이 MEK1을 yeast내에서 동시 발현시켜 LF의 활성을 검증하였다. 먼저 효모(Saccharomyces cerevisiae)를 숙주로 하여 LF의 기질인 MEK1 발현 vector를 구축하였고, 구축된 발현 system을 기본을 LF 활성을 검증하고자 yeast에 형질전환하여 plasmid의 안전성 및 MEK1 유전자의 발현 및 LF에 의한 MEK1 아미노말단의 절단 부위를 확인하였다. 본 연구는 세포내 검증 system 도입의 기초적 자료를 제공하였으며, yeast내의 MEK1 발현은 탄저병의 저해제 선별 및 활성 측정 검증을... -
새로운 스트레스 단백질인 VISP의 세포내 위치
문창훈, 윤원준, 고명석, 김현주, 박정우, Moon. Chang-Hoon, Yoon. Won-Joon, Ko. Myoung-Seok, Kim. Hyun-Ju, Park. Jeong-Woo 한국미생물학회 미생물학회지 6 Pages
한국미생물학회 미생물학회지 2006, Vol.42 No.4 271-276 (6 pages)
enhanced green fluorescent protein (EGFP)이 붙은 fusion gene을 발현하는 plasmid를 제조하였다. EGFP-VISP를 발현하는 plasmid 벡터를 세포에 transfection 시킨 후 confocal microscope로 관찰한 결과 핵 주변에 점구조를 형성함이 확인되었다. VISP의 아미노산서열 중 핵 주변의 점구조 형성에 관여하는 부분을 확인하기 위하여 VISP의 다양한 deletion mutant들을 제조하였다. 이 mutant를 사용한 transfection 실험 결과 VISP의 C-terminal 부위(aa 612-710)가 핵주변의 점구조 형성에 중요한 역할을 담당함이 확인되었으며, 이... -
Streptomyces griseus IFO13350 유래 sprA 및 sprB 유전자를 이용한 Pretense 생산균주 개발
황지환, 이창권, 이강무, 조병기, 박해룡, 황용일, Hwang. Ji-Hwan, Lee. Chang-Kwon, Lee. Kang-Mu, Jo. Byoung-Kee, Park. Hae-Ryong, Hwang. Yong-Il 한국미생물학회 미생물학회지 6 Pages
한국미생물학회 미생물학회지 2005, Vol.41 No.1 87-92 (6 pages)
sprB를 각각 cloning하여 plasmid pHJ201과 pHJ202를 구축하였다. 이들 plasmid들을 S. griseus IFO 13350에 형질전환하여 발현용plasmid가 chromosome에 integration된 재조합 균주 S. gliseus HA와 S. griseus HB를 얻었다. 이들 재조합균주로부터 전체 protease의 생산량을 확인한 결과, 모균주보다 각각 S. griseus HA는 약 5.3 배, S. griseus HB는 약 5 배 정도 생산량이 증대되었다. 이들 결과로부터 특정유전자의 고발현용 integration vector의 제작이 확인되었으며, 전체 protease의 생산량 증대의 가능성이 시사되었다. -
Yeast내에서 탄저병 원인균인 Bacillus anthracis의 치사독소인 Lethal Factor 단백질 발현
황혜현, 김정목, 최경재, 정회일, 한성환, 구본성, 윤문영, Hwang. Hyehyun, Kim. Joungmok, Choi. Kyoung-Jae, Chung. Hoeil, Han. Sung-Hwan, Koo. Bon-Sung, Yoon. Moon-Y 한국미생물학회 미생물학회지 6 Pages
한국미생물학회 미생물학회지 2005, Vol.41 No.4 275-280 (6 pages)
할 수 있다. 본 연구에서는 탄저독소의 치료제 개발을 위해 선행되어야 하는 LF 고처리량 활성검증방법 및 저해제 선별에 더 높은 효율을 가지기 위해 이러한 시스템 방법 등을 이용하여 세포내 검정방법의 기초 자료를 마련하고자 하였다. 이를 위하여 yeast를 숙주로 한 LF 발현 vector의 구축과, 구축한 발현 시스템을 yeast에 형질전환 하여 plasmid의 안정성 및 LF유전자의 발현을 확인하였다. 본 연구는 LF유전자의 발현을 진핵세포 내에서 처음으로 시도했으며, 세포내 검증 시스템 도입의 기초적 자료를 제공하였다. Yeast내에서의... -
Sphingomonas sp. HS362에 의한 Phenanthrene 분해특성
김수화, 홍승복, 강희정, 안진철, 정재훈, 손승렬, Kim. Su Hwa, Hong. Seung-Bok, Kang. Hee Jeong, Ahn. Jin-Chul, Jeong. Jae Hoon, Son. Seung-Yeol 한국미생물학회 미생물학회지 7 Pages
한국미생물학회 미생물학회지 2005, Vol.41 No.3 201-207 (7 pages)
}C$, pH $4{~}8$, NaCl $1{\%}$ 이하의 농도인 조건하에서 배양했을 때 가장 우수했으며, 특히 전분과 SDS, Tween 85, Triton X-100와 같은 계면활성제를 첨가해 주었을 때 분해가 증진되었다. 또한, 전배양을 통해서 phenanthrene의 분해가 증진되는 것을 볼 때에 분해효소가 유도되는 것으로 추측할 수 있었다. Spltingomonas sp. HS362는 5개의 plasmid를 가지고 있는데, 그중에서 plasmid p4를 잃었을 때에는phenanthrene을 분해하지 못하는 것으로 보아plasmid p4가 phenanthrene분해와 밀접한 관련이 있는 것으로 보인다. -
접합전달을 이용한 Streptomyces natalensis ATCC27448의 형질전환 최적화 및 attB-site의 특성연구
이강무, 최선욱, 박해룡, 황용일, Lee. Kang-Mu, Choi. Sun-Uk, Park. Hae-Ryong, Hwang. Yong-Il 한국미생물학회 미생물학회지 6 Pages
한국미생물학회 미생물학회지 2005, Vol.41 No.2 140-145 (6 pages)
S. natalensis로 plasmid DNA를 직접 도입하는 형질전환법을 확립하였다. 이러한 S. natalensis의 형질전환은 oriT와 attP 단편을 가지고 있는, ${Phi}C31$ 유래의 integration 벡터인 pSET152를 이용하여 Escherichia coli ET12567/pUZ28002을 DNA 공여체(donor)로 이용한 접합전달법(conjugal transfer)을 사용하여 확립하였다. 접합전달의 가장 높은 효율은 10 mM의 $MgCl_2$를 포함한 MS 배지에서, $6.25 imes10^8$의 E. coli 공여체와 열처리를 하지 않은 S. natalensis의 포자를 사용하여 얻어졌다. 또 얻어진 접합전달체... -
Corynebacterium glutamicum의 sigH 유전자의 분리 및 기능분석
김태현, 김형준, 박준성, 김연희, 이흥식, Kim. Tae-Hyun, Kim. Hyung-Joon, Park. Joon-Sung, Kim. Younhee, Lee. Heung-Shick 한국미생물학회 미생물학회지 6 Pages
한국미생물학회 미생물학회지 2005, Vol.41 No.2 99-104 (6 pages)
두 개의 인접한 ORF가 발견되었고 이중 ORF2가 reporter plasmid의 $eta-galactosidase$의 활성 감소에 직접적으로 기여함을 알 수 있었다. ORF1은 206아미노산으로 구성된 23,218 Dalton의 단백질을 발현하는 것으로 여겨졌고, 유사성 분석결과 ECF-type에 해당되는 RNA polymerase의 sigma factor를 암호화하는 것으로 보여 sigH로 명명하였다. 유전자 sigH의 기능을 밝히기 위해 gene disruption technique을 이용하여 sigH 유전자가 기능을 하지 못하는 돌연변이 균을 제작하였으며 이 균주는 야생형에 비해 성장속도가 저하됨을... -
김치에서 tetracycline 내성 유산균의 분리
강효진, 김병천, 박완 한국미생물학회 미생물학회지 6 Pages
한국미생물학회 미생물학회지 2004, Vol.40 No.1 1-6 (6 pages)
대구지역에서 수집한 50점의 김치 중에서 10점의 김치로부터 tetracycline내성 세균을 분리하였다. 이 균주들의 tetracycline에 대한 MIC는 25-100 mg/l 이상의 범위로 분포하였으며 다른 항생제에 대한 내성도 다양하였다. tet(M), tet(O)특이적 primer를 이용한 PCR에서 HJ9 한 균주에서만 tet(M)유전자가 검출되었으며, tet(M)은 플라스미드상에 존재하는 것으로 나타났다. HJ9 균주의 tet(M)부분 염기서열을 분석한 결과 기존에 보고된 Gram양성균의 tet(M)의 DNA 염기서열 및 아미노산 서열과 각각 90-99%, 94-100%의 높은 상동성을...


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