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901.

Saccharomyces cerevisiae에서 Human Procarboxypeptidase B의 과발현 분비생산과 그 특성

김미정, 김미진, 이재형, 김연희, 서진호, 남수완, Kim. Mi-Jung, Kim. Mi-Jin, Lee. Jae-Hyung, Kim. Yeon-Hee, Seo. Jin-So, Nam. Soo-Wan 한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 6 Pages

한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 2008, Vol.36 No.1 49-54 (6 pages)

김미정, 김미진, 이재형, 김연희, 서진호, 남수완, Kim. Mi-Jung, Kim. Mi-Jin, Lee. Jae-Hyung, Kim. Yeon-Hee, Seo. Jin-So, Nam. Soo-Wan 저

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후 GAL10 promoter 하류에 Saccharomyces cerevisiae mating factor alpha-1 secretion signal $(MF{alpha}-1)$과 연결하여 $MF{alpha}1$-pro-CPB를 구축하였다. 구축된 plasmid $pY{alpha}$-hproCPB(7.72 kb)를 S. cerevisiae 2805에 형질 전환시켰다. 재조합 인간 proCPB(hproCPB)는 galactose 유도로 S. cerevisiae에서 성공적으로 발현되었고, 배양상등액으로 분비되었다. SDS-PAGE와 western blot 분석에 의해, 정제된 hproCPB 단백질이 약 45.9kDa임을 확인하였다 S. cerevisiae $2805/pY{alpha}$-hproCPB의 발효조 회분배양 시...
902.

Corynebacterium glutamicum에서 발현된 L-Threonine Aldolase를 이용한 파킨슨병 치료제 L-threo-2,3-Dihydroxyphenylserine (L-threo-DOPS)의 합성

백상호, Baik. Sang-Ho 한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 7 Pages

한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 2008, Vol.36 No.2 128-134 (7 pages)

백상호, Baik. Sang-Ho 저

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aldolase를 Corynebacterium glutamicum R에서 과잉발현시키기 위하여 Corynebacterium용 vector plasmid인 pCRB1의 SD배열과 개시코든사이의 1염기를 제거한 고발현용 vector plasmid인 pCG-H44(2)를 구축하였다. pCG-H (2)에 의해서 형질전환된 C. glutamicum R 균주(CGH44-2)에서 L-TA를 발현시킨 결과, 기존의 Corynebacterium용 vector plasmid인 pCRB1(CGH44-1)보다 L-TA의 발현량이 높았다. L-threo-DOPS의 합성을 위한 최적조건은 $30^{circ}C$, 0.1 M cirtric acid buffer(pH 7.0)이었으며, 0.1% TritonX-100를 첨가하였을 경우...
903.

Penicillin G Amidase생산을 위한 재조합 대장균의 유가배양에 관한 연구

이상만, Lee. Sang-Mahn 한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 6 Pages

한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 2008, Vol.36 No.4 314-319 (6 pages)

이상만, Lee. Sang-Mahn 저

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pET-pga plasmid를 제작하였고, 이것을 E. coli BL21 (DE3) 균주에 형질 전환하여 PGA를 발현하고 그 활성을 분석하였다. E. coli BL21(DE3)/pET-pga 균주의 고밀도 배양액을 SDS-PAGE로 분석 했을 때, PGA의 precursor, large subunit, 그리고 small subunit으로 보이는 protein band가 나타났으며, PGA가 soluble form의 precursor로 발현되어 processing을 거쳐서 large subunit과 small subunit으로 절단되기도 하고, 일부는 insoluble form의 precursor로 발현되기도 하는 것으로 생각된다. 유가배양시 온도변화 전략을 사용하여...
904.

저독성의 새로운 양이온성 리포좀을 이용한 유전자의 전달

강현구, 도경오, 서영배, Kang. Hyun-Gu, Doh. Kyung-Oh, Seu. Young-Bae 한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 6 Pages

한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 2006, Vol.34 No.4 329-334 (6 pages)

강현구, 도경오, 서영배, Kang. Hyun-Gu, Doh. Kyung-Oh, Seu. Young-Bae 저

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다양한 비율로 중성지방인 DOPE와 섞어서 만든 후 $100{sim}200nm$의 membrane으로 extrusion시켜 균일한 리포좀을 제작하여 크기 및 전위를 측정하였다. 형광단백질 및 luciferase plasmid의 발현을 여러가지 세포에서 확인한 결과 우수한 발현양상을 보였으며 혈청이 있는 조건에서도 발현이 증가임을 볼수 있었으며, 합성 ODNs의 전달도 adipocyte cell 에서도 잘 이루어지는 것을 확인할 수 있었다 임상실험에 쓰이는 저독성의 DC-chol에 비교하여도 독성이 적은 리포좀임을 알 수 있으며 혈청하에서도 안정하게 유전자를 전달할 수...
905.

Saccharomyces cerevisiae에서 발현된 Endoinulinase를 이용한 Inulooligosaccharides의 생산

김현철, 김현진, 김병우, 권현주, 남수완, Kim. Hyun-Chul, Kim. Hyun-Jin, Kim. Byung-Woo, Kwon. Hyun-Ju, Nam. Soo-Wan 한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 7 Pages

한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 2005, Vol.33 No.4 281-287 (7 pages)

김현철, 김현진, 김병우, 권현주, 남수완, Kim. Hyun-Chul, Kim. Hyun-Jin, Kim. Byung-Woo, Kwon. Hyun-Ju, Nam. Soo-Wan 저

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Saccharomyces cerevisiae에 발현시키기 위해 대장균과 효모의 shuttle vector (GALl promoter함유)에 subcloning하여 구축된 pYGENIU27 (8.6 kb) plasmid를 S. cerevisiae SEY2102에 형질전환하였다. Uracil이 결핍된 SD배지와 inulin이 포함된 배지에서 효모 형질전환체를 선별하였다. 효모 형질전환체의 배양에서 endoinulinase는 periplasmic space에 다량 존재함이 확인되었다. YPDG배지에서 재조합 endoinulinase는 총 활성 1.81unit/ml으로 생산되었다. Inulooligosaccharides (IOSs) 생산을 위한 효소의 최적 반응 조건으로 pH...
906.

Saccharomyces cerevisiae에서 Tkermomonospora fusca Exoglucanase의 발현 및 Cellulose분해에의 응용

박현순, 김현철, 신동하, 김중균, 남수완, Park. Hyun-Soon, Kim. Hyun-Chul, Shin. Dong-Ha, Kim. Joong-Kyun, Nam. Soo-Wan 한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 7 Pages

한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 2005, Vol.33 No.4 267-273 (7 pages)

박현순, 김현철, 신동하, 김중균, 남수완, Park. Hyun-Soon, Kim. Hyun-Chul, Shin. Dong-Ha, Kim. Joong-Kyun, Nam. Soo-Wan 저

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에서 섬유소 분해효소를 유전공학적 방법으로 생산하였다. Thermomonospora fusca 유래의 exoglucanase유전자(E3)를 구성적 ADHl promoter 하류에 subcloning하여 구성적 발현계인 plasmid pVT-TE태(8.8 kb)를 제작하였고, 이를 S. cerevisiae 숙주세포 SEY2102에 형질전환 시켜, YPD에서 배양한 결과, 총 생산된 exoglucanase의 avicelase 활성은 190 unit/l에 도달하였고, 분비효율은 $50\%$, plasmid 안정성은 $91\%$로 나타났다. 재조합 exoglucanase의 양은 Clostridium endoglucanase(CelA)와 Trichoderma endoglucanase(C4) 보다...
907.

Streptomyces longwoodensis로부터 Autoregulator Receptor Protein 유전자의 클로닝 및 특성

여수환, 이성봉, 김현수, Yeo. Soo-Hwan, Lee. Sung-Bong, Kim. Hyun-Soo 한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 10 Pages

한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 2005, Vol.33 No.2 96-105 (10 pages)

여수환, 이성봉, 김현수, Yeo. Soo-Hwan, Lee. Sung-Bong, Kim. Hyun-Soo 저

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위치에 존재하는 것을 확인하였다. 형질전환된 plasmid로 PCR을 수행한 후, 염기배열을 결정하여 분석한 결과, Streptomyces sp. 유래의 receptor gene의 일부분임이 확인되었다. 따라서 S. longwoodensis IFO 14251에는 lysocellin 생산에 관여한다고 추정되는 autoregulator receptor protein을 코드하는 유전자가 존재할 것으로 예상되어 100 bp의 PCR product를 probe로 이용하여 Southern 및 colony hybridization을 통하여 4.4 kb의 SphI 단편을 가지는 plasmid(pSLT)를 제작하였고 이를 sequencing한 결과, Streptomyces 속 유래의...
908.

Bacillus subtilis에서 발현된 재조합 Endoxylanase 농축과 안정화 공정의 최적화

최영록, 박정하, 남수완, 김영만, 권현주, 김병우, Choe. Yeong-Rok, Park. Jeong-Ha, Kim. Yeong-Man, Gwon. Hyeon-Ju, Kim. Byeong-U 한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 6 Pages

한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 2004, Vol.32 No.4 322-327 (6 pages)

최영록, 박정하, 남수완, 김영만, 권현주, 김병우, Choe. Yeong-Rok, Park. Jeong-Ha, Kim. Yeong-Man, Gwon. Hyeon-Ju, Kim. Byeong-U 저

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B. subtilis에서 과발현 하였다. 발현된 plasmid, pJHKJ4는 자체 promoter($P_{B}$)와 Bacillus의 강력한 promoter($P_{JH}$)가 tandem으로 위치하여 transcription되었다. B.subtilis DB431에 형질전환된 균주를 glucose가 함유된 LB 배지에서 배양 후 총활성 및 분비효율은 140 U/ml 으로 나타났다. 배양상등액은 ultrafiltration(MW cut off 10 kDa and 30 kDa)과 염석법으로 농축하였다. 효소의 농축에서 ultrafiltration이 70% ammonium sulfate precipitation 보다 효과적이었다. $50^{circ}C$ 에서 농축된 효소액의 안정화는 NaCl,...
909.

Pilot 규모에서의 재조합 대장균을 이용한 (R)-3-Hydroxybutyric acid 생산

최종일, 이승환, 최성준, 이상엽 한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 6 Pages

한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 2004, Vol.32 No.3 243-248 (6 pages)

최종일, 이승환, 최성준, 이상엽 저

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Pilot 규모에서의 R3HB생산을 위하여 안전한 two plasmid system pBRRed와 pMCS 105를 제작하였으며, 제작된 plasmids을 이용하여 여러 다른 대장균을 형질 전환하였다. 얻어진 재조합 대장균들을 30 l의 발효기에서 회분식 배양한 결과 대장균 XL-10 Gold(pBRRed, pMCS105)가 가장 높은 R3HB 농도를 보였다 30 1 발효기에서 대장균 XL-10 Gold (pBRRed, PMCS105)을 유가식 배양한 결과 22.4 g/1의 R3HB가 얻어졌으며, 생산성은 0.97 g/1-h를 보였다. 고농도의 R3HB를 고생산성으로 얻기 위하여 유가식 배양으로 높은 균체 농도를 얻은 후...
910.

Saccharomyces cerevisiae에서 발현된 Cycloinulooligosaccharide Fructanotransferase을 이용한 Cyclofructan의 생산

임채권, 김현철, 김광현, 김병우, 남수완 한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 7 Pages

한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 2004, Vol.32 No.1 60-66 (7 pages)

임채권, 김현철, 김광현, 김병우, 남수완 저

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Saccharomyces cerevisiae SEY2102 에 발현시키기 위해 대장균과 효모의 shuttle vector인 pYES 2.0(GALI) promoter)에 subcloning하였다. 구축된 pYGCFT(9.9kb) plasmid를 S. cerevisiae SEY2102에 형질전환하였고, uracil이 결핍된 SD 배지에서 선별하였다. 선별된 형질전혼체(S. cerevisiae SEY2102/pYGCFT)는 galactose 첨가에 의해 성공적으로 발현되어 cyclofructan(CF)을 생셩함을 TLC로 확인하였다. 그러나 균체외로의 효소 분비는 이루어지지 않았고 cytoplasm 보다 periplasmic space에 많이 존재하였다. 효소반응 3시간부터...

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