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생물방제균 Pseudomonas stutzeri YPL-1의 형질전환 조건
김용수, 김상달 한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 6 Pages
한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 1990, Vol.18 No.5 454-459 (6 pages)
통한 유전공학적 육종방법의 기초를 확립하고자 하였다. 이를 위해 plasmid pKT230을 vector로 하여 형질전환의 가능성을 조사하였으며 이때, 혈질전환에 필요한 최적조건을 조사한 결과 P.stutzeri YPL-1의 형질전환에는 대수증식기 초기의 균체가 가장 적합하였고, 20mM RbCl과 100mM $CaCl_2$를 함유한 냉각용액에 1${mu}g$/ml의 plasmid DNA를 첨가하였을 때 최대의 형질전환 빈도를 나타내었다. 또한 plasmid DNA와 competent cell를 혼합한 후 $0^{circ}C$에서 60분간 처리하는 것이 가장 효과적이었으며 이와 같은 조건에서... -
CAM 플라스미드를 함유하는 Pseudomonas putida PpG1에서 TOL 플라스미드이 DNA 재배열
전효곤, 조경연, 고영희 한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 4 Pages
한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 1990, Vol.18 No.4 433-436 (4 pages)
접합에 의한 P.putida mt-2의 TOL를 CAM 함유 P.putida PpG1으로 이동시켜 형성된 접합주 P.Putida CST3A는 작아진 TOL(TOL$Delta$)를 가지고 있었지만, m-toiuate를 분해할 수 있었다. 접합에 의한 이동실험은 CAM에 결합되어 CAM:TO* 플라스미드를 형성하고 있었다. 불화합성 Inc P9군에 속하는 NAH를 CAM:TOL* 과 TOL$Delta$을 가지는 P.putida CST3A로 이동시키면 TOL$Delta$의 방출이 관찰되었으나 m-toluate 대사에는 아무런 영향을 미치지 않았다. -
Fed-batch 배양에 의한 알칼리내성 Bacillus 속 Promoter의 발현조절
조석철, 박혜영, 조형용, 변유량, 김인규 한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 5 Pages
한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 1990, Vol.18 No.4 406-410 (5 pages)
sp.의 자체 chromosomal DNA에서 유래된 strong promoter를 지닌 plasmid p-12B1을 공여균주에 삽입시키고 이 promoter의 활성을 최적화할 수 있는 배양조건을 검토하였다. 글루코오스가 고갈된 시점부터 세포의 활성은 유지되나 포자는 형성되지 않을 정도로 낮은 글루코오스 소비속도를 유지해 제한된 글루코오스를 연속적으로 공급해줌으로써 promoter의 활성을 최대로 높일 수 있었다. 또한 배지조성의 변화로 균체를 생육시킨 후 유전자 발현을 유도하는 것이 가능하였으며, 이 점에 대해서는 보다 구체적인 연구가 진행되어야 할... -
Kluyveromyces fragilis의 LEU gene의 Cloning
박성희, 이동선, 우주형, 김종국, 홍순덕 한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 4 Pages
한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 1990, Vol.18 No.3 305-308 (4 pages)
Shuttle plasmid vector인 pHN114를 이용하여 Kluyveromyces fragilis의 3-isopropylmalate dehydrogenase 유전자를 cloning 하였다. 그 결과 Saccharomyces cerevisiae의 leu2변이와 E.coli의 leuB변이를 상보하는 두가지 clone 체 pJK104와 pJK106을 얻었다. Restriction mapping 결과 이들은 서로 반대방향으로 삽입되어 있었으며 expression activity는 pJK104가 높았다. pJK104에 삽입된 유전자를 BglII와 SalI으로 끊은 1.6kb fragment를 probe 로 하여 Southern Hybridization 한 결과 유전자의 유래가 Kluyveromyces fragilis... -
Multi-copy Streptomyces 플라스미드, pJY501의 재조합 유도체의 특성
염도영, 공인수, 유주현 한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 4 Pages
한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 1990, Vol.18 No.1 94-97 (4 pages)
Thiostrepton 내성 유전자(tsr)를 포함하는 multicopy 재조합 플라스미드 pJY502(5.5kb)의 제한효소 지도를 비교해본 결과 pJY502는 새로운 플라스미드로 확인되었다. pJY502는 Streptomyces에서 넓은 host range를 나타내었으며 cloning에 사용할 수 있는 단일 BglII 제한효소 인식부위를 갖고 있었다. pJY502의 형질전환 빈도는 S.lividans에서 $2.2 imes 10^5$이었다. 또한 E.coli-Streptomyces bifunctional 플라스미드 pJY504을 제조하였다. -
대장균 배양 중 phe W$^+$-pheS-$^{-ts}$ System에 의한 재조합 trp$^+$ 플라스미드의 안정적 유지
강충민, 최장원, 이세영 한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 5 Pages
한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 1990, Vol.18 No.1 89-93 (5 pages)
재조합 pBR322-trp$^+$ 플라스미드의 숙주내 안정적 유지를 목적으로 tRNA phe 의 구조유전자인 pheW$^+$ 유전자를 pBR322-trp$^+$의 플라스미드에 도입시키고, 숙주세포로는 트립토판 생산을 위한 정상숙주 LC901의 phenylalanyl tRNA synthetase 온도감수성 변이체인 LC901-pheS-ts를 구성하여 이 온도감수성 숙주의 제한온도 (restrictive temperature)에서 재조합 trp$^+$ 플라스미드의 안정적 유지와 trp$^+$ 유전자가 미치는 효과를 조사하였다. -
야생 Killer 효모 Candida dattila의 분리 및 동정
최언호, 장해춘, 정원철, 정은영 한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 5 Pages
한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 1990, Vol.18 No.1 1-5 (5 pages)
본 연구는 야생 killer 효모에 의한 포도주의 이상발효를 방지하고 오염균주에 내성이 강한 killer 특성을 이용하는 전 단계로서 국내 포도에서 생육하는 야생 killer 효모를 분리하고자 수행되었다. 그 결과 17개의 killer 효모 균주를 분리하였고 그 중 K109와 K112의 killer 활성이 가장 강하였으며, K117 균주의 killer 활성이 가장 약하였다. 분리된 17개의 균주는 서로의 상호작용에 의하여 생육을 억제하는 특성을 보이지 않았으며, 생리학적 및 배양학적 특성을 조사한 결과 지금까지 killer 효모로서 보고된 적이 없는 Candida... -
TOL 플라스미드 세균의 분리와 특성
Nam. Cho-Byung, Cho. In-Sun, Rhee. Young-Ha, Ryu. Jae-Keun, Min. Kyung-Hee 한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 6 Pages
한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 1989, Vol.17 No.4 321-326 (6 pages)
m-Toluate 최소배지에서 선택적 enrichment culture를 통하여 82개의 세균의 균주를 분리하였으며, ol들 중 두 균주는 Pseudomonas cepacia, 한 균주는 P. Putida, 한 균주는 Yersinia intermedia, 그리고 한 균주는 Flavobacterium odoratum으로 동정되었다. P. cepacia SUB37은 P. putida mt-2의 TOL 플라스미드와 비슷한 크기의 플라스미드를 가지고 있었으며, Flavobacterium odoratum과 Yersinia intermedia는 이보다 더 큰 플라스미드를 갖고 있었다. P. cepacia SUB37은 streptomycin에 감수성을 나타내었으나, rifampicin에는... -
국내 농작물의 근부토양에서 분리한 Pseudomonas 내에서의 Bacillus thuringiensis 독소단백질 유전자의 발현
Tag. Koo-Bon, Shin. Byung-Sik, Park. Seung-Hwan, Park. Ho-Yong, Kim. Jeong-Il 한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 6 Pages
한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 1989, Vol.17 No.4 295-300 (6 pages)
독소 단백질의 생태학적 응용방법을 개발하기 위한 목적으로 우선 독소 단백질 유전자를 옮겨 발현시키기에 적합한 숙주 미생물의 분리작업을 수행하였다. 국내 주요농산물인 고추, 감자, 무우 등 7가지 농작물의 뿌리부근에 군락을 형성하는 35종의 형광성Pseudomonas들을 분리하였고 독소 단백질 유전자를 함유하는 재조합 plasmid에 대한 숙주로서의 이응가능성을 검토해 보기 위하여 분리균주 35주에 대한 형질전환을 실시한 결과 4주에 독소 단백질 유전자의 도입이 가능하였고 생물검정과 면역학적인 방법 등에 의한 결과 BT 독소... -
Subcloning and Enhanced Expression of the $eta$-Xylosidase Gene Cloned from Alkalophilic Bacillus sp. K-17
Sung. Nack-Kie, Ko. Hack-Ryong, Kho. Yung-Hee, Chun. Hyo-Kon, Chung. Young-Chul 한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 6 Pages
한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 1989, Vol.17 No.4 283-288 (6 pages)
HindIII 절편을 포함하는 pAX278의 Insert 크기를 줄이기 위하여 subcloning을 행한 결과, 1.4kb EcoRI-XbaI 절편이 subcloning되었으며 이를 pAK 208로 명하였다. Plasmid pAX208에 의해 형질전환된 대장균은 $eta$-xylosidase 활성이 pAX278의 경우보다 약 1.3배 증가하였고 또한, $eta$-xylosidase의 활성을 증가시키기 위하여 강력한 tac-promoter를 가진 pKK223-3 plasmid vector를 이용하여 대장균에 cloning 및 발현시켰을 때, pAX278을 가진 대장균 형질전환체와 유전자 source균인 호알칼리성 Bacillus속 K-17에 비하여 각각...