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알카리 내성 Bacillus속 Promoter의 Cloning
유주현, 구본탁, 공인수, 정용준, 박영서 한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 5 Pages
한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 1988, Vol.16 No.2 126-130 (5 pages)
토양에서 분리한 알카리 내성 Bacillus sp. YA-14 의 promoter를 Bacillus promoter probe vector인 pPL703을 이용하여 Bacillus subtilis내에 cloning 하였다. 얻어진 형질전환체 중 promoter 활성이 가장 높은 균주의 CAT 비활성은 8.07로 expression vector인 pPL708의 CAT 비활성보다 2.5배 이상 높았으며 대수 증식기가 끝난 이후에 그 활성이 급격하게 증가하였다. 재조합 plasmid내의 삽입 DNA 단편은 그 크기가 2.8kb이고 제한효소 BamHI, Sal I 인식부위가 각각 한군데 존재하였다. -
Restriction Mapping of Cloned Pullulanase Gene and Property of Pullulanase Produced in Escherichia coli (pYKL451) and Klebsiella pneumoniae NFB-320
Yu. Ju-Hyun, Chung. Kun-Sub, Kong. In-Su, Lee. Jung-Kee 한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 5 Pages
한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 1987, Vol.15 No.6 436-440 (5 pages)
의 재조합 plasmid DNA pYKL451을 얻었다. 이러한 pullulanase 유전자에 대한 유전적 정보를 얻기 위해 여러 가지 제한효소로 단일 혹은 이중 절단을 행하여 삽입된 pullulanase 유전자의 제한효소 절단지 도를 작성하였으며, E. coli(pYKL451)과 K. pneumoniae NFB-320이 생산하는 pullulanase의 효소적 특성을 조사하였다. 생산되는 두 균주의 효소는 50-55$^{circ}C$ 부근에서 최적온도를 나타냈으며 최적pH는 모두 6.0이었다. 효소 안정성에 미치는 pH의 영향은 4$0^{circ}C$에서 90min 간 방치했을 때 pH 5.0-10.0에서 안정하였으며... -
Enterobacter agglomerans의 질소고정유전자 Cloning
정건섭, 이정기, 민태익, 변유량, 유주현 한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 6 Pages
한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 1987, Vol.15 No.2 116-121 (6 pages)
갖는 E. agglomerans NFB-264의 질소고정유전자를 cloning 하였다. E. agglomerans NFB-264의 total DNA를 Hind III로 절단하여 부분적으로 pBR 322에 연결하여 Escherichia coli K060에 도입한 후 negative selection 및 colony hybridization 방법으로 형질전환미생물을 선별하였다. 형질전환미생물로부터 recombinant plasmid인 pNEL10과 pNES20을 얻었다. pNEL 10은 nif Q-X probe DNA와 hybridization 되는 12Mdal의 삽입외래 DNA를 함유하였으며, pNES20은 nif NE와 nif YK probe DNA와 hybridization 되는 5 Mdal의 외래 DNA가... -
재조합 효모 세포내에서의 간염백신 생산
Park. Cha-Yong, Lee. Hei-Chan 한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 6 Pages
한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 1986, Vol.14 No.6 455-460 (6 pages)
간염 보균자의 혈액으로부터 Dane 입자를 분리하였다. Dane 입자의 핵으로부터 분리해낸 DNA는 $alpha$-($^{32}$P) dNTP 존재하의 DNA 폴리머레이즈 반응 후 액체 씬틸레이션 카운터와 한천 전기영동 및 가이거 뮐러 카운터에 의하여 간염의 DNA임이 확인되었다. 간염 바이러스에 의한 감염을 막기 위한 백신으로서의 B형 간염 바이러스 표면항원을 생산하기 위하여 산성포스파테이즈 프로모터를 갖는 재조합 프라스미드를 함유하는 효모균주를 사용하였다. 재조합 프라스미드는 pHBV 130 및 pAM 82로부터 제작되었으며 대장균에... -
수질환경에서 일어나는 항생물질 내성유전자의 전이와 재조합
김치경, 이성기, 김영창 한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 6 Pages
한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 1986, Vol.14 No.3 245-250 (6 pages)
청주시 무심천의 하천수에서 항생물질에 내성을 나타내는 Gram 음성 세균을 분리하여 수질환경에서 일어나는 R 플라스미드의 전이를 연구하였다. 분리된 균주사이에서 접합에 의한 R 플라스미드의 전이는 실험실 환경에서 1.1$ imes$$10^{-6}$-1.2$ imes$$10^{-7}$, 하천의 수질환경에서 1.2$ imes$$10^{-7}$-1.0$ imes$$10^{-9}$으로 나타나, 자연의 수질환경에서도 R 플라스미드의 전이가 일어남을 확인하였다. 또 T-44 균주의 Ap$^{r}$Cm$^{r}$Tc$^{r}$ 플라스미드는 형질전환에 의하여 E. coli HB 101에 1.7$ imes$$10^{-6}$의 비율로... -
알카리내성 세균의 생리적 특성 및 형질전환
유주현, 정용준, 정건섭, 오두환 한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 6 Pages
한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 1986, Vol.14 No.3 239-244 (6 pages)
되어 이 plasmid가 안정하게 유지되는 균주를 선정하여 알카리내성 Bacillus sp. YA-14로 동정하였다. 분리균주의 amylase와 protease는 각각 pH 8.0과 pH 7.5에서 가장 활성이 높았으며 피검균으로 사용한 B. subtilis와 Sarcina lutea에 항균력을 나타내었다. 분리균주의 형질전환에는 0.4% MgSO$_4$ 가 함유된 modified SPI배지 (MSPI, pH8.0)를 사용하였으며 말기대수증식기의 균체가 적당하였다. Transformant는 20세대 계대배양 후에도 pUB,110plasmid가 안정하게 유지되어 형질발현되었다. 이 결과로부터 분리균주는 Bacillus속의... -
YRp7 vector를 이용한 Bacillus amyloliquefaciens amylase gene의 cloning I I. Saccharomyces cerevisiae에서 발현
서정훈, 김영호, 전도연, 배영석, 홍순덕, 이종태 한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 6 Pages
한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 1986, Vol.14 No.3 213-218 (6 pages)
B. amyloliquefaciens amylase유전자를 cloning하여 만든 pEA24를 형질전환시켰다. 먼저 YRp7 plasmid를 이용하여 형질전환 최적 조건을 검토하여 본 바, PH 7과 8사이, 반응온도 3$0^{circ}C$에서 40%의 polyethylene glycol(MW 4,000)을 처리한 후 2 %의 agar를 함유한 재생배지에 중층도말 하였을 때 형질전환율이 가장 높았다. 형질전환주로부터 생성된 amylase의 활성을 측정한 결과, S. cerevisiae에서 약간의 amylase활성을 나타내어 최고 B. amyloliquefaciens의 2% 정도였고, 세포외효소는 검출되지 않았다. 이들 형질전환 주가... -
YEp 13 vector를 이용한 Bacillus amyloliquefaciens amylase gene의 cloning II. Saccharomyces cerevisiae에서의 발현
김관필, 서정훈 한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 4 Pages
한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 1986, Vol.14 No.3 209-212 (4 pages)
pTG 17-1, pTG 17-2로 명명하였으며 S. cerevisiae MC 16에서 형질전환이 가능한 pTG 17-2 DNA를 제한효소 EcoRI과 Pst I으로 restriction한 결과 EcoRI으로 처리한 경우는 7.3, 4.8, 2.4 kb인 3개의 분획으로 나타났으며 Pst I으로 처리한 경우는 linear로 14.5kb임을 알았으며 이로써 pTG 17-2 plasmid의 size가 약 14kb임을 알았다. 또한 E.coli균체내에서의 ampicillin sensitive로써 이 plasmid의 ampicillin resistance site가 결실되었음을 알았고 효모의 형진전환체로 부터의 $alpha$-amylase는 균체외로 분비되지 않았고... -
YRp 7 vector를 이용한 Bacillus amyloliquefaciens amylase gene의 cloning I. Escherichia coli에서의 발현
서정훈, 김영호, 전도연, 홍순덕, 조윤래 한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 8 Pages
한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 1986, Vol.14 No.2 161-168 (8 pages)
E. coli-S. cerevisiae shuttle vector인 plasmid YRp7을 이용하여 B. amyloliquefaciens의 $alpha$-amylase gene을 E. coli 내에 cloning하였다. 이때 제한 효소 Sau 3 AI에 의해 얻어진 $alpha$-amylase gene의 크기는 약 1.95kb정도였으며 E. coli내에서 비교적 안정하게 유지되고 발현되었다. 재조합 plasmid p-EA24를 함유한 E. coli는 B. amyloliquefaciens의 약 65% 정도의 $alpha$-amylase를 생성하였으며, 최적온도, pH, CaCl$_2$의 영향등 $alpha$-amylase의 효소학적인 성질을 비교 조사해 본 결과 B. amyloliquefaciens의... -
YEp 13 vector를 이용한 Bacillus amyloliquefaciens amylase gene의 cloning I. Escherichia coli에서의 발현
이창후, 서정훈 한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 6 Pages
한국미생물생명공학회 산업미생물학회지 1986, Vol.14 No.2 155-160 (6 pages)
활성 측정 결과, B. amyloliquefaciens에 대해 20-30%의 상대 활성도를 나타내었다. 형질전환주의 경우 생성된 $alpha$-amylase의 60-65%가 periplasm에 축적되었으며 세포 외부로의 분비는 없었다. Hybrid DNA를 agarose-gel 전기영동으로 조사한 결과 그 크기가 다른 다수의 hybrid DNA가 확인되었으며 pHA28의 plasmid (a)(Fig.3)에서만 $alpha$-amylase 활성을 나타내는 것으로 밝혀졌다 pHA28의 plasmid(a)의 크기가 YEp 13 plasmid DNA보다 작은 것은 YEp13 plasmid에서 yeast gene부분이 deletion된 결과로 추측되었다.