Ps. fluorescens을 malonate가 함유된 배지에서 배양하였을 때 glyoxylate cycle의 주 효소인 isocitrate lyase가 유도되었다. malonyl-CoA decarboxylase가 같은 조건에서 유도된다는 사실을 고려할 때 malonate는 다음과 같은 경로를 따라 대사가 이루어 진다고 간주된다. malonate${ ightarrow}$malonyl-CoA${ ightarrow}$acetyl-CoA${ ightarrow}$glyoxylate cycle. malonate 대사 과정에서 유도된 isocitrate lyase을 황산암모니움에 의한 분별 침전, Sephadex G-200, DEAE-cellulose 컬럼 크로마토그라피에 의하여 약 30배 정제 하였고, 이때의 효소 회수율은 약 24%이었다. 이와 같이 얻은 isocitrate lyase를 polyacrylamide gel에서 전기 영동한 결과 2개의 띠를 나타냈으며, 그 중 하나의 띠에만 효소의 활성이 검출되었다. Sephadex G-200 컬럼 크로마토그라피에 의해 측정된 이 효소의 분자의 크기는 155,000 dalton이었다. 이 효소의 최적 pH는 7.5이었다. 기질인 isocitrate에 대하여 반응속도를 측정한 결과 Michaelis-Menten 반응속도론에 부합하였으며, 이때의 Km 및 Vmax는 각각 0.27 mM과 4.14 ${mu}$moles/min/mg이었다. 효소 활성이 SH 저해물질인 p-chloromercuric phenylsulfonic acid에 의하여 억제되었다. 따라서 효소 활성 부위 또는 그 근처에 SH기 가 있음을 의미한다.
Malonate-grown Pseudomonas fluorescens induced isocitrate lyase which is one of key enzymes of glyoxylate cycle. In consideration of the previous investigation that molonate-grown Pseudomonas also induced malonyl-CoA decarboxylase, the following metabolic pathway is suggested; malonate-malonyl-CoA-acetyl-CoA-glyoxylate cycle. The malonate induced isocitrate lyase was purified nearly 30 folds by the combination of ammonium sulfate precipitation, gel filtration and DEAE-cellulose ion exchange chromatography. Polyacrylamide gel electrophoresis showed two major bands, which one contained the enzymatic activity. The molecular weight of the enzyme was 155,0000 and its pH optimum was pH 7.5. The enzyme showed a typical Michaelis-Menten substrate saturation, with an apparent Km and Vmax of 0.27 mM and 4.14 ${mu}$moles/min/mg, respectively. Thiol-directed reagent, p-chloromercuric phenyl sulfonic acid, inhibited this enzyme.
