전분, 덱스트린등과 같은 다당류의 비환원성 말단으로부터 glucose 단위로 $alpha$-1, 4-글루칸 결합을 가수분해하는 글루코아밀라제를 Aspergillus shirousamii로부터 분리하였다. 이 균을 밀기울 배지에 배양시킨 곡자를 증류수로 추출한 다음, DEAE-Sephacel, Con-A Sepharose column을 통과시키고 isoelectric focusing을 시행하여 47.5%의 수율로 19.8배의 활동도 증가를 얻었다. 이 효소의 분자량은 89,000달톤으로 추정되었으며 pI 값은 3.4이었다. 이 효소는 $55^{circ}C$ 이하에서는 매우 안정하여 1시간 처리에서도 거의 모든 효소활성을 유지하였으나 $70{circ}C$이상에서는 불안정하여 10분간에 모든 효소활성을 소실하였다. 최대의 가수분해는 15분간 반응시에는 $65^{circ}C$에서, 60분간 반응시는 $60^{circ}C$에서 얻어졌다. 이 효소는 pH 4.5에서 가장 안정하였고 최적 pH도 4.5이었다. $Hg^{++}$은 이 효소의 작용을 저해하였으며 $Ca^{++}$은 효소활성 상승에는 영향을 주지 않았으나 효소의 열에 대한 안정성을 크게 향상시켰다. 대부분의 음이온들이 효소활성을 저해하였으며 그중 $B_4{O_7}^{-2}$, $As{O_2}^-$ 및 $S{O_3}^{-2}$가 가장 저해 작용이 커 각각 94% 및 88%의 저해 효과를 주었다. 기질의 종류에 따른 효소반응 속도는 maltotriose가 maltose에 비해 2배 이상의 속도를 보였으며 isomaltose는 0.15배, p-nitrophenyl $alpha$-D-glucopyranoside는 0.066배로 가수분해속도가 늦었다. 고분자량의 기질중에서느 아밀로펙틴의 가수분해 속도가 가장 빨랐으며 덱스트린이 가장 늦은 속도를 보였다.
Glucoamylase ($alpha$-1,4 glucan glucohydrolase, EC 3.2.1.3) of Aspergillus shirousamii was purified using ammonium sulfate fractionation, DEAE-Sephacel chromatography, affinity chromatography on Concanavalin-A Sepharose 4B and isoelectric focusing. The purification achieved was 19.8 fold from crude extract with a yield of 47.5%. Its molecular weight was estimated to be about 89,000 by Sephadex G-200 gel filtration and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The pI value of the enzyme was 3.4. The enzyme was stable below $55^{circ}C$ and retained almost full activity after 1 h. But, it was very labile over $70{circ}C$. At this temperature, it lost almost all activity witin 10 min. Maximum hydrolysis was occured at $65^{circ}C$ for 15 min and $60^{circ}C$ for 60 min, respectively. The enzyme was most stable at pH 4.5, and was more stable in the acidic region than in neutral region. The pH optimum of the enzyme was 4.5 with p-nitrophenyl $alpha$-D-glucopyranoside as a substrate. The enzyme activity was inhibited by $Hg^{++}$, $Ca^{++}$ markedly increased the heat stability of the enzyme, but it did not affect on the enzyme activity. Most of the anions tested showed the inhibition effect on the enzyme activity. Among these, $B_4{O_7}^{-2}$, $As{O_2}^-$ and $S{O_3}^{-2}$ inhibited remarkably up to 94%, 95% and 88%, respectively. In kinetic studies, the enzyme hydrolyzed maltotriose more than twice of the rate for maltose. Isomaltose and p-nitrophenyl $alpha$-D-glucopyranoside showed much lower relative rate of hydrolysis than maltose, 0.15 and 0.066, respectively. For the highmolecular-weight substrates, amylopectin showed the highest and dextrin showed the lowest relative rate of hydrolysis, respectively.
