인시목 곤충에 독성을 나타내는 B. thuringiensis 가운데서 subspecies kurstaki HD-73으로부터 독소 유전자를 E. coli에 cloning하였다. 먼저 biotin으로 표지된 DNA probe (pC34)로서 전체 plasmid들과 hybridization한 결과, 75 kb plasmid상에 독소유전자가 존재함을 알았다. 75 kb plasmid를 제한효소 BgIII로 절단하여 vector pBR322에 삽입시켜 독소유전자를 포함하는 14.3 kb의 삽입부위를 가지는 clone인 pMK73을 얻었고, 이를 subcloning하여 3.7 kb의 독소유전자만을 포함하는 clone을 얻었다. 이 clone들의 total cell extract들은 흰불나방 유충에 독성을 나타내어 독소유전자의 E. coli에서의 발현을 확인할 수 있었다.
Insecticidal crystal protein (CP) gene of Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD-73 has been identified to be located in a 75-kilobase plasmid by southern hybridization technique using the biotinylated DNA probe (pC34), and cloned into the gram negative bacterium, Escherichia coli. E. coli transform ants harboring full length or truncated (nearly full length) CP genes have expressed them with no significant differences in their larvicidal activity. The crude extracts of E. coli clones were seen to be about 30-fold less potent than that of HD-73, as long as the larvicidal activity against the fall webworm, Hyphantria cunea, is concerned.
