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효율높은 cloning system을 통한 Rat Liver 전장 낙산탈수소효소 A-cDNA의 제조 및 분리동정
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  • 효율높은 cloning system을 통한 Rat Liver 전장 낙산탈수소효소 A-cDNA의 제조 및 분리동정
  • Rapid and Efficient Molecular Cloning of Rat Liver Full-length LDH A-cDNA
저자명
노옥경,배석철,이승기
간행물명
약학회지
권/호정보
1987년|31권 2호|pp.116-125 (10 pages)
발행정보
대한약학회
파일정보
정기간행물|
PDF텍스트
주제분야
기타
이 논문은 한국과학기술정보연구원과 논문 연계를 통해 무료로 제공되는 원문입니다.
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기타언어초록

It is still difficult and time consuming to obtain cDNA sequences that contain the entire nucleotide sequence of the corresponding mRNA. A rapid and high efficient cloning method to obtain full-length cDNA segments is thus developed. The cloning procedure described here consists of the construction of oligo(dT)-tailed vector primer using pWR34 plasmid, polyadenylation of mRNA-cDNA heteroduplex using terminal deoxytransferase, and replacement of MRNA strand with DNA by RNase H and DNA polymerase I. The restriction endonuclease analysis shows that the size of inserted-cDNA is in the range of 1.5~4.0 kb long suggesting that most of cloned cDNA are full-length or nearly full-length cDNA. The plasmid-DNA recombinants obtained were 4$ imes$$10^5$~$10^{6}$ per $mu extrm{g}$ of rat liver poly (A$^+$)mRNA, which is 4 to 10 fold higher cloning efficiency in comparison to the presently used methods for full-length cDNA cloning. The results indicate that the described cloning system is much simpler, less time consuming, and very efficient cloning method to construct a cDNA library.