Methyl donor로 S-adenosyl-L-methionine을 사용해서 기질 단백질중 비정상 아미노산인 L-isoaspartyl residues의 ${alpha}$-free carboxyl group을 methylester화 시키는 반응을 촉매하는 Protein Carboxyl Methyltransferase(PCM)를 소뇌에서 25%의 수득률로 약 1,000배 정제하였다. 소뇌의 cytosol을 70% ammonium sulfate fractionation, DEAE-cellulose chromatography, SAH-Sepharose 4B affinity chromatography 방법으로 정제하였으며, 정제된 효소용액을 HPLC (DEAE-5PW column)로 분석하여 3종류의 isoenzymes을 분리하였고 용출되는 순서에 따라 PCMI, PCMII, PCMIII으로 명명하였다. 더욱 정제된 효소용액으후 2차 전기영동한 결과 isoelectric point가 각각 6.25, 6.20, 5.80이었고 분자량은 모두 28,000이었다. 이 HPLC 분석방법은 소량의 사료로도 3개의 isoenzymes을 분리할 수 있는 장점을 지니고 있으므로 이 방법에 의해 비정상조직에서의 PCM isoenzymes 분포형태를 조사 할 수 있다.
Protein carboxyl methyltransferase(S-adenosylmethionine: protein carboxyl O-methyltransferase, EC 2.1.1.77) of which methyl esterified L-isoaspartyl residues of protein substrate using S-adenosyl-L-methionine as a methyl donor has been purified from bovine brain approximately 1,000-fold with a yield of 25%. The enzymes were purified by following steps: 70% ammonium sulfate fractionation, DEAE-cellulose chromatography and SAH-sepharose 4B affinity chromatography. High performance liquid chromatography with anion-exchange column was utilized for the separation of protein carboxyl methyltransferase isoenzymes, and these enzymes were found to exist as three isoenzymes. The pI values of its isoenzymes were 6.25, 6.20, 5.80 respectively and the molecular weights of all isoenzymes were 28,000 by two-dimensional electrophoresis.
