해녀콩 (Canavalia lineata ) 자엽의 arginase (L-arginine amidino hydrolase, EC3.5.3.1)를 정제하여서 그 특성을 조사하였다. 이 효소는 황산스트렙토마이신 침전, $AmSO_4$ 분획, DEAE-Sephacel, canavanine-Sepharose 4B affinity gel 및 Sephadex G-200 gel 크로마토그래피를 한 결과 4%의 회수율로 fold는 217배 증가되었다. 이상 3 종류의 컬럼크로마토그래피에서 ADA (arginine-dependent activity)와 CDA (canavanine-dependentactivity)의 활성은 항상 같은 fraction에서 peak를 보였다. 그리고 최적 pH는 ADA의 경우9.0이었고 CDA의 경우 8.0과 8.5이었다. 또한 arginine에 대한 $K_m$은 pH 9.0에서 30 mM, pH 8.0에서 82 mM이였다. 이에 비하여 canavanine에 대한 효소의 $K_m$은 pH 9.0에서 62 mM, pH 8.0에서 43 mM이었다. 이러한 결과에서 생리적인 pH에서는 canavanme에 대한 효소의 친화성이 arginine에 대한 친화성 만큼 높은 것으로 추정할 수 있었다. 1 mM $Mn^{2+}$일 때 효소의 활성이 최대로 나타났으며 최적온도는 $40^{circ}C$이었다. Sephadex G-200 gel 컬럼에서 arginase의 분자량은 180,000이었으며, SDS-PAGE에서 얻은 subunit의 분자량은 44,000임을 알 수 있었다.
Arginase (L-arginine amidino hydrolase, EC 3.5.3.1) from cotyledones of Canavalia lineata was purified and characterized. The purification steps involved streptomycin sulfate precipitation, ammonium sulfate fractionation, DEAE-Sephacel ion-exchange chromatography, canavanine-Sepharose 4B affinity chromatography, and Sephadex G-200 gel filtration chromatography. Arginase was purified 217-fold with 4% recovery. These column chromatography revealed that ADA (arginine-dependent activity) and CDA (canavanine-dependent activity) eluted the same peak. The pH optimum was 9 for ADA and 8 / or 8.5 for CDA. Kinetic analyses of purified arginase for arginine revealed an apparent $K_m$, of 30 mM at pH 9 and 82 mM at pH 8. Comparable determinations with canavanine revealed an apparent $K_m$, of 62 mM at pH 9 and 43 mM at pH 8. It is suggested that the affinity for canavanine with this enzyme at physiological pH be as high as that for arginine. 1 mM $Mn^{2+}$ was required for the optimal enzyme activity and maximum activity was exerted at $40^{circ}C$. The molecular weight was estimated as 180,000 by Sephadex G-200 gel filtration chromatography and subunit molecular weight was obtained as 44,000 by SDS-PAGE.
