트립신으로 절단한 재조합 소성장호르몬의 펠타이드 조각을 분리, 정제하기 위하여 강이온 교환 HPLC와 역상 HPLC의 2차원 고성능 액체 크로마토그래피법을 이용하였다. 1차원적으로 역상 HPLC만을 이용해 펩타이드를 분리하였을 때에는 두 가지 이상의 서로 다른 펩타이드가 섞여 있는 heterogeneous peak이 발견되였다. 그러나 2차원 HPLC에 의해 펩타이드를 분리 시켰을 때에는 고도로 정제된 펩타이드를 얻을 수 있였다. 트립신 절단 결과 생긴 펩타이드를 모두 분리시키기 위해 1차적으로 강 양이온 교환 HPLC를 시행하였다. 이 결과 9개의 서로 다른 peak를 분리해 냈으며, 각각의 peak들을 다시 역상 HPLC하여 2차적인 분리를 시도하였다. 여기에서 얻은 peak들을 아미노산 서열분석을 통해 명료한 서열 분석결과를 얻어 낼 수 있었다. 또한 이 과정을 통해 53번 Cys과 164번 Cys 그리고 181번 Cys 사이에 disulfide bond가 존재하고 있음도 동시에 확인할 수 있었다.
In order to separate and purify tryptic digested recombinant bST (rbST), 2-dimensional HPLC which involves a combination of strong cation-exchange chromatography and reverse-phase chromatography was applied. A single dimension RP-HPLC resulted in several heterogeneous peaks. However, all fractions purified by two-dimensional chromatogrphy resulted in homogeneous peptides and unambiguous sequence data. With a view of separating perfectly, tryptic digest was first fractionated by strong cation-exchange chromatogrphy. The nine fractions were obtained from this chromatogrphy and each of these fractions was applied to RP-HPLC. Fractions yielded from RP-HPLC were submitted for direct sequence analysis and clear sequence data were obtained. In this study, the location of disulfide bonds, Cys53-Cys164 and Cys181-Cys189, also were confirmed in rbST.
