한국산 뱀으로부터 스파르가눔을 수집하여 cysteine proteinase를 26배 순수 정제하고, 특성을 관찰한 후 이에 대한 단세포군 항체를 제조하였다. 정제된 효소의 최적 pH는 5.5 이었고, thiol 의존성을 나타냈으며 저분자 합성 기질인 CBZ-phe-arg-AFC에 대하여 활성이 높음을 나타내었다. 또한 단백질 분해효소 억제인자 중 cysteine proteinase 특이 억제 인자인 E-64, NEM, iodoacetic acid에 의하여 활성이 완전히 억제됨을 관찰할수 있었으며 정제된 cysteine proteinase의 분자량은 Ultrogel AcA 54 column chromatography로 측정하고 SDS-PAGE로 확인한 결과 28 kDa이었다. 스파르가눔 추출물로 면역 시킨 Balb/c 마우스의 비장세포와 myeloma 세포를 융합하여 Ig G1 subtype을 가진 항체를 분비하는 1개의 하이브리도마 세포주를 얻었다. 이항체는 cysteine proteinase와 특이하게 반응함을 확인 하였다.
A soluble thiol-dependent proteinase with molecular weight of 28 kDa was isolated and partially purified from Sparganum using ion exchange chromatography on DEAE-Triacryl M and Sepharose 4B affinity chromatography. This enzyme had maximal activity at pH 5.5 and showed inhibitor susceptibilities similar to the vertebrate acidic cysteine proteinases. One hybridoma cell clone, MASPC38 (Ig G1) producing monoclonal antibody against partially purified cysteine proteinase was established. No cross reactivity was observed with six other parasite antigens. This antibody may be useful to detect the specific cysteine proteinase and/or circulating antigen of this parasite.
