- Enterokinase에 의한 Glucagon.3-Interleukin-2 {G.3-IL-2} 의 단백질 분해 연구
- ㆍ 저자명
- 이운영,이지원,김인호
- ㆍ 간행물명
- 한국생물공학회지
- ㆍ 권/호정보
- 2000년|15권 3호|pp.238-242 (5 pages)
- ㆍ 발행정보
- 한국생물공학회
- ㆍ 파일정보
- 정기간행물| PDF텍스트
- ㆍ 주제분야
- 기타
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Enterokinase에 의한 G3-IL-2 가수분해 반응에 있어서의 urea 는 글루카곤과 IL-2를 분리하고자 하는 데에 펼요한 절단 부위 가 잘 노출되도록 도움을 주는 역할을 하는데 1.0 M이상의 높 은 농도에서 오히려 원하는 단백질의 변성에 영향을 미침을 알 수 있었다, 그리고 효소 반응 시에 효소의 활성에 도움을 주는 첨가제는 반응 후에 침전이 생기고, IL-2의 회수율에는 오히려 나쁜 영향을 주었다. 그리고 반응시간에 따른 반응의 효과는 24 시간 이후에는 효소에 의한 가수분해 반응이 진행되지 않음이 관찰되었다. 가수분해 반응 후의 순수한 IL-2의 회수율은 약 1 5 5~35% 정도였고, 반응 조건에 따라 수융은 차이가 있었다. IL-2는 시간이 지남에 따라 분자 상호 간의 응집에 의해 oligomer의 형태가 되어 본래의 크기보다 더 커져 RP-HPLC에서 더 빨리 용리되는 결과를 얻을 수 있었다.
A fusion protein of human interleukin-2(hiL-2) and glucagon which was expressed in Escherichia coli. was digested with enterokinase for recovery of hIL-2 from the fused protein. To obtain hIL-2 of optimum recovery hydrolysis reaction were performed under various conditions of urea additives and reaction time. hIL-2 was finally purified by RP-HPLC(reversed phase-HPLC) to remove cleaved G3 fusion partner and residual uncleaved G3-IL-2 HIL-2 was eluted in a single peak at 100% acetonitrile at 28 min. Optimum urea concentration was found to be 0.5 M and 24 h reaction time was sufficient without any additive such as CaCl2 and Tween-20.