- 대장균에서 chaperons 분자와 저온배양에 의한 CGTase의 가용성 발현 증대
- ㆍ 저자명
- 박소림,김성구,권미정,남수완
- ㆍ 간행물명
- 생명과학회지
- ㆍ 권/호정보
- 2004년|14권 1호|pp.121-125 (5 pages)
- ㆍ 발행정보
- 한국생명과학회
- ㆍ 파일정보
- 정기간행물| PDF텍스트
- ㆍ 주제분야
- 기타
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E. coli에서 B. macerans 유래 cyclodextrin glucanotransferase (CGTase)의 활성형 생산에 GroEL/ES chaperone과의 공발현과 저온 배양의 공동작용 효과에 대해 조사하였다. 실험에 사용된 cgt와 groEL/ES 유전자를 발현하는 pTCGTl과 pGroll은 각각 T7 promoter와 Pzt-1 promoter에 의해 조절되고 이들을 E. coli에 도입시켰다. 대수증식기 초기(2 hr)와 대수증식기 중기(3 hr)에 tetrarycline 10 ng/ml 과 IPTG 1 mM을 첨가하여 각각의 유전자를 발현시켰다. CGTase활성과 specific artivity 측정 시 $37^{circ}C$에서 pTCGTl 단독 발현 보다 $25^{circ}C$에서 chaperone과 함께 발현시킨 경우 2배나 높은 활성이 측정됐으며, SDS-PACE 분석결과 $37^{circ}C$에서 단독 발현 시킬경우 20% 정도 가용성 형태로 발현되던 것이 $25^{circ}C$에서 chaperone과 공발현 시에는 거의 3.5배가 넘는 69%가 가용성으로 전환됨을 알 수 있었다. 이와 같이 분자 chaperone과 $25^{circ}C$에서의 저온 배양은 E. coli에서 활성형질 가용성 CGTase의 생산 증가에 큰 영향을 미치는 것으로 나타났다.
The synergistic effect of lowered incubation temperature and CroEL/ES expression on the production of soluble form of B. macerans cyclodextrin glucanotransferase (CGTase) was studied in recombinant E. coli. pTCGTl and pGroll carrying the cgt and groEL/ES genes under the control of T7 promoter and pzt-I promoter, respectively, were co-introduced. Tetracycline (10 ng/ml) and IPTG (1 mM) were added at the early-exponential phase (2 hr) and mid-exponential phase (3 hr). Low temperature cultivation at $25^{circ}C$ with groEL/ES expression improved the activity of CGTase by two fold, compared to $37^{circ}C$ cultivation without chaperones. SDS-PACE analysis revealed that about 69% of CGTase in the total CGTase protein was found in the soluble fraction by overexpression of GroEL/ES and cultivation at$25^{circ}C$, whereas 20% of CGTase was detected in the soluble fraction when E. coli was cultivated at $37^{circ}C$ without chaperone. The amount of soluble CGTase from $25^{circ}C$ culture with chaperone was 3.5-fold higher than that of $37^{circ}C$ culture without chaperone. Therefore the expression of CroEL/ES and low temperature cultivation greatly enhanced the soluble production of CGTase in E. coli.