목적: 사람 대식세포 유주 저지 인자는 많은 감염성 질환에 의한 패혈증의 병인론과 숙주의 염증 및 면역 반응의 조절에 중요한 역할은 하는 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 사람의 혈중에서 대식세포 유주 저지 인자를 측정할 수 있는 방사면역측정법을 개발하고자 하였다. 대상 및 방법 : 사람 대식세포 유주저지 인자에 대한 단클론 항체를 포획항체로, 비오틴화된 다클론항체를 검출 항체로 사용하였다. 사람 대식세포 유주 저지인자를 검출하기 위하여 스트렙타비딘에 $^{125}I$를 방사성추적자로 사용하고 재조합 사람 대식세포 유주저지인자를 이용하여 표준투여 응답곡선을 작성하였다. 스트렙타비딘에 $^{125}I$의 표지는 Chloramine-T법을 사용하고, 분리정제는 한외여과법을 사용하였다. $^{125}I$-스트렙타비딘의 안정성을 60일까지 평가하였다. 표지수율과 안정성은 ITLC법을 사용하였다. 방사면역측정법의 유용성은 intra- 와 inter-assay의 변이계수 측정, 재현도 및 희석 실험 등을 시행하였다. 결과: $^{125}I$-스트렙타비딘의 표지수율은 88%이었으며, 분리 정제된 $^{125}I$-SA의 방사화학적 수율은 99%였다. $^{125}I$-스트렙타비딘는 60일까지 93%의 안정성을 나타내어 방사면역측정의 방사성추적자로 사용하는데 적합하였다. 작성된 표준투여 응답곡선에서 재조합 사람 대식세포 유주 저지 인자의 농도와 결합된 $^{125}I$-스트렙타비딘의 방사능 값은 높은 상관관계를 나타내었다($R^2=0.99$). 가장 높은 intra-와 inter-assay의 변이계수 간이 각각 5.5%와 7.6%로 나타났다. 시료 내에서 평균 recovery 측정값은 102%였다. 시료의 농도 희석에 따른 방사능의 측정치는 직선적인 상관관계를 나타내었다($R^2=0.97$). 결론: 대식세포 유주 저지 인자의 농도 측정을 위하여 방사성추적자로 $^{125}I$-스트렙타비딘를 이용한 방사면역측정법을 확립하였으며, 이 방법을 이용하여 다양한 염증성 질환을 가진 임상환자에서 대식세포 유주 저지 인자의 혈중 농도와 임상적 의의와의 상관관계를 규명하는데 이용될 수 있을 것으로 기대된다.
Purpose: There has been a renewal of interest in Macrophage migration inhibitory factor (MIF), especially correlation in pathogenesis of sepsis by many infectious diseases and in regulation of host inflammatory and immune response. We developed immunoradiometric assay (IRMA) to determine serum human MIF concentration. Materials and Methods: The IRMA system utilizes solid phase bound monoclonal anti-recombinant human MIF (rhMIF) antibody as a capture antibody, biotinylated polyclonal anti-rhMIF antibody as a detector antibody. We applied with rhMIF that concentration of standard solutions increased from 0 ng/ml to 100 ng/ml. We used $^{125}I$-streptavidin (SA) as radiotracer to determination of rhMIF concentration. Streptavidin was labeled with $^{125}I$ by Chloramine-T method and $^{125}I$-SA was purified by ultracentrifugation. $^{125}I$-SA stability was evaluated by ITLC analysis at $4^{circ}C$ and room temperatures until 60days. To validate IRMA system for MIF, we experimented intra-assay and inter-assay coefficients of variation, recovery test and dilution test. Results: Radiolabeling yield of $^{125}I$-SA was 87% and purified $^{125}I$-SA retained above 99% radiochemical purity. $^{125}I$-SA showed above 93% stability in $4^{circ}C$ until 60days that it is good for immunoradiometric assay as radiotracer. Plotted standard dose response curve showed that increased concentration of rhMIF linearly correlated (R2=0.99) with bound radioactivity of $^{125}I$-SA. The highest intra- and inter-assay coefficients of variation were 5.5% and 7.6%, respectively. The average of recovery of MIF in samples was 102%. In dilution test, linear response curves were obtained (R2=0.97). Conclusion: Radioimmunoassay using $^{125}I$-SA as radiotracer thought to be useful for the determination of serum MIF concentration, and further, its data will be used to evaluate the correlation between clinical significance and serum MIF concentration in patients with various inflammatory diseases.
