혈전성 질환을 예방 및 치료할 수 있는 트롬빈 직접 저해제 개발은 전 세계적으로 지속적으로 이루어지고 있다. 본 연구에서는 안전성이 확보된 식용 및 약용식물로부터 트롬빈 직접저해제를 탐색하였으며, 그 결과 메밀 종자의 메탄올 추출물 및 주정 추출물에서 강력한 트롬빈 저해활성을 확인하였다. 메탄올 추출물의 순차적 유기 용매 분획 결과 부탄올 및 에틸아세테이트 분획물에서 가장 우수한 트롬빈 저해활성을 나타내었다. 특히 주정 추출물의 부탄올 분획의 경우 $312.5{mu}g/mL$의 낮은 농도에서도 $2,000\%$이상의 트롬빈 저해 활성을 나타내어, 아스피린보다 매우 효율적으로 혈전 생성을 억제함을 확인하였다. 활성성분은 30 KD 이상의 고분자 비단백질 성분임을 확인하였으며, 산 및 열처리에 의해 급격한 활성 감소가 나타나, 활성 물질의 효율적인 이용을 위해서는 메밀 종자의 비열, 비산 처리공정이 필요하리라 추측되었다. 또한 활성 분획물은 ICR 마우스를 이용한 폐색전 실험, 전뇌 허혈성 실험 및 치사유발실험에서 아스피린보다 우수한 혈전성 마비 억제, 혼수방지 및 치사억제 활성을 보여, 혈행 개선제 및 항혈전제로 개발 가능함을 제시하였다.
Direct thrombin inhibitor, which is effective to prevent or cure the thrombosis, has been investigated in worldwide. In this study, we tried to screen antithrombosis agent from edible or medicinal plant. A strong antithrombin activity was identified from methanol or $95\%$ ethanol extract of buckwheat seeds. The solvent fractionation of buckwheat extracts using hexane, ethylacetate, butanol revealed that the butanol fraction has a prominent antithrombin activity. Thrombin time (blood-clot formation time) exceeded to over $2,000\%$ by addition of the butanol fraction at concentration of $312.5{mu}g/mL$, whereas thrombin time extended to $336\%$ by addition of aspirin at concentration of $1,500{mu}g/mL$. The butanol fraction showed anthrone-positive and ninhydrine-negative reaction. The active components were heat-liable, acid-unstable non-proteinous macromolecules (>30 KD). In vivo analysis using ICR male mouse showed that the buckwheat extract was superior than the aspirin in pulmonary thrombosis, KCN-induced coma and death. Our results suggest that the buckwheat is a potential as an antithrombosis agent and medicinal food.
