T-DNA 매개 형질전환은 삽입 돌연변이를 가지는 형질전환 식물체를 만들기 위한 유용한 방법이다. 애기장대의 shoot 발달 과정에서 중요한 역할을 하는 유전자를 확인하기 위해, 프로모터 trap 식물체 라인을 제작하고 분석하였다. 이를 위해 효율적인 프로모터 trap 백터인 pFGL561을 제작하였다. pFGL561은 basta 저항성 유전자, multiple splicing donor acceptor 서열들, 그리고 프로모터가 없는 GFP 리포터 유전자를 포함하고 있다. Agrobacterium 균주인 GV3101에 pFGL561을 도입하고, 이를 매개로 하여 300개의 $T_1$ 프로모터 trap 식물체를 제작하였고, 이들 식물체에서 GFP 발현을 조사하였다. $T_1$ 식물체에서 GFP 발현 비율은 26.7%로 매우 높았고, 이러한 발현은 $T_2$ 식물체에서도 재확인되었다. 한편, 식물의 shoot 발달에 관여하는 주요 유전자를 동정하기 위해서, shoot에서 GFP발현을 보인 19개 $T_1$ 식물체에서 유래한 $T_2$ 식물체를 대상으로 표현형을 조사한 결과, 비정상적인 shoot발달을 보이는 6개 $T_1$ 라인을 확인하였다. 이들 식물체는 shoot발달의 조절 기작 분석에 매우 유용하게 사용될 수 있을 것이다.
T-DNA-mediated transformation is a common method for generating transgenic plants with insertional mutagenesis. In order to identify important genes involved in shoot development, a system of promoter trap insertional mutagenesis was employed in Arabidopsis thaliana. For this system, an efficient promoter trap vector, pFGL561 was developed. The pFGL561 includes a basta-resistant gene, an intron with multiple splicing donor and acceptor sites, and a promoter-less GFP reporter gene. Using floral-dipping method, we made total 300 $T_1$ promoter-trap lines which were screened for GFP expression. GFP signals in the $T_1$ plants were detected with high frequency, 26.7%, and the signals were reconfirmed in $T_2$ plants. To isolate the genes that are involved in shoot development, phenotypes were analyzed in $T_2$ plants of the 19 $T_1$ lines that had GFP signals in shoot apex, and 6 $T_1$ lines were selected that had abnormal shoot development. These lines will be very useful for the investigation of shoot development.
