Akt/PKB는 세포의 증식, 분화, 사멸, 혈관신생 등 매우 많은 생리활성 조절에 있어 매우 중요한 역할을 수행한다. 우리는 Akt/PKB의 tyrosine잔기의 인산화가 $Thr^{308}$ 인산화에 필수적임을 밝혔다. COS-7 세포주에 EGF를 처 리하면 Akt/PKB의 tyrosine 잔기에 인산화가 촉진되었으며 이러한 인산화 촉진은 Akt/PKB에 myristoylation site를 이용해 세포막으로 이동시키면 더욱 더 증가하였다. 특히, 분리된 Akt/PKB와 EGF 수용체를 이용해 인산화 반응을 실시하면 tyrosine잔기의 인산화뿐만 아니라 $Ser^{473}$에 대한 인산화도 증가하였다. 더욱이 tyrosine잔기에 인산화 된 Akt/PKB는 활성화된 EGF 수용체와 직접적인 결합을 이루고 있음을 확인하였다. 마지막으로 예측되는 tyrosine 잔기인 $(Tyr^{326})$을 Alanine으로 치환하면 정상 Akt/PKB뿐만 아니라 활성화된 Akt/PKB의 EGF에 의한 $Thr^{308}$ 인산화가 사라짐을 확인하였다. 이러한 결과들을 바탕으로 EGF 수용체에 의한 직접적인 Akt/PKB의 tyrosine 인산화는 EGF에 의한 많은 생리활성 조절기전의 또 다른 기전이라 볼 수 있다.
Akt/PKB plays pivotal roles in many physiological responses such as proliferation, differentiation, apoptosis, and angiogenesis. Here we show that tyrosine phosphorylation of Akt/PKB is essential for the subsequent phosphorylation at $Thr^{308}$. Tyrosine phosphorylation of Akt/PKB was induced by stimulation of COS-7 cells with epidermal growth factor receptor (EGF) and its phosphorylation was significantly enhanced by constitutive targeting of Akt/PKB to the plasma membrane by myristoylation. Interestingly, incubation of affinity purified Myc-tagged Akt/PKB with purified EGF receptor resulted in tyrosine phosphorylation as well as $Ser^{473}$ phosphorylation of Akt/PKB. In addition, tyrosine-phosphorylated Akt/PKB could directly associate with activated EGF receptor in vitro. Finally, alanine mutation at putative tyrosine phosphorylation site $(Tyr^{326})$ abolished EGF induced $Thr^{308}$ phosphorylation of wild type as well as constitutively active form of Akt/PKB. Given these results we suggest here that direct tyrosine phosphorylation of Akt/PKB by EGF receptor could be another mechanism of EGF-induced control of many physiological responses.
