Kluyveromyces marxianus 유래의 exoinulinase (INU1) 분비 서열과 GAL10 promoter를 이용하여 Clostridium thermocellum endoglucanase A gene (celA)의 과발현과 분비 성능 검증연구를 수행하였다. 자체 분비 서열을 가지는 pYEG- CT1 과 INU1 분비 서열을 가지는 pYInu-CT1, 두개의 plasmid는 S. cer-evisiae SEY2102와 S. cerevisiae 2805에 각각 형질전환시켜 ur-acil이 결핍된 배지에서 선별하였다. celA gene 자체 분비 서열보다 INU1 분비 서열을 사용했을 때 발현량과 분비효율은 각각 약 $18{sim}22%$ 와 11% 향상되었다. 이 중 361 unit/l의 발현율과 89%의 plasmid 안정성, 그리고 70%의 분비효율을 보인 S. cerevisiae 2805/pYinu-CT1 효모 형질전환체를 cellolose를 효과적으로 분해하는 재조합 효모 생균체로 선별하였다. Galactose 배지내에서 S. cerevisiae 2805/ pYInu-CT1의 발효조 회분배양 결과, 총발현량과 분비효율은 각각 418 unit/l 와 73% 로 나타났다. 또한 분비된 endoglucanase A는 분자량 100kDa 이상에서 활성 밴드를 보여, N-linked 당쇄부가에 의해 상당한 비율의 당쇄가 부가됨을 추측할 수 있었다.
The secretory overexpression of Clostridium thermocellum endoglucanase A gene (celA) was examined in Saccharomyces cerevisiae using Kluyveromyces marxianus exoinulinase (INU1) signal sequence and GAL10 promoter. The two plasmids, pYEG-CT1 with its own signal sequence, and pYInu-CT1 with INU1 signal sequence were introduced to S. cerevisiae SEY2102 and S. cerevisiae 2805 host strains, respectively, and then each transformant was selected on the synthetic defined media lacking uracil. The expression level and secretion efficiency of endoglucanase A was increased by $18{sim}22%$ and 11%, respectively, by INU1 signal sequence over celA signal sequence. By considering the high level of expression (361 unit/I), plasmid stability (89%), and secretion efficiency (70%), S. cerevisiae 2805 harboring plasmid pYInu-CT1 was selected as the opti-mal host vector system for the production of cellulose-degrading enzyme and recombinant yeast probiotic. The total expression and secretion efficiency of endoglucanase A was 418 unit/l and 73%, respectively, in the batch fermentation of S. cerevisiae 2805/pYlnu-CT1 on galactose medium. The mo-lecular weight of secreted endoglucanase A was found to be greater than 100 kDa, presumably due to the N-linked glycosylation.
