A. nidulans ${alpha}$-COP과 상호작용하는 단백질을 동정하기 위하여 ${alpha}$-COP을 암호하는 유전자를 bait로 yeast two-hybrid 스크리닝용 A. nidulans cDNA 라이브러리를 탐색한 결과, COPI 소낭의 구성요소 중 하나인 ${varepsilon}$-COP을 암호화하고 있는 유전자를 동정하고 $aneA^+$($underline{A}$spergillus $underline{n}$idulans $underline{e}$psilon-COP, $AN{varepsilon}$-COP)으로 명명하였다. $aneA^+$ 유전자는 총 296개의 아미노산을 암호화하고 있으며, 다른 균류의 ${varepsilon}$-COP과 높은 상동성을 보였다. Yeast two hybrid 시스템으로 두 단백질 간의 상호작용 부위를 분석한 결과, ${alpha}$-COP의 COOH 도메인과 ${varepsilon}$-COP의 C-말단부가 필수 부위였으며, ${alpha}$-COP N-말단의 WD 도메인과 ${varepsilon}$-COP의 TPR 부위는 두 단백질 간의 결합을 촉진하는 조절부위로 밝혀졌다. 또한 사상균인 A. nidulans와 효모류인 S. cerevisiae에서 ${alpha}$-COP과 ${varepsilon}$-COP 간 작용양상이 유사한 것으로 보아, COPI 소낭의 구성요소인 ${alpha}$-COP과 ${varepsilon}$-COP 간의 상호작용 기전은 진핵세포 내에서 진화적으로 잘 보존되어 있는 것으로 추정되었다.
In order to screen interactor(s) of the Aspergillus nidulans ${alpha}$-COP of COPI vesicle, we performed the yeast two hybrid screening by using the gene for A. nidulans ${alpha}$-COP as a bait and identified ${varepsilon}$-COP of the COPI vesicle as an interacting protein. The A. nidualns gene for the ${varepsilon}$-COP was designated $aneA^+$ ($underline{A.}$ $underline{n}$idulans $underline{e}$psi-lone-COP), which encoded 296 amino acid residues with high level of identity with orthologs from other fungi. Domain analyses with yeast two-hybrid system suggested that the interaction between ${alpha}$-COP and ${varepsilon}$-COP relied on the C-terminus of both proteins, and that the N-terminal WD domian of ${alpha}$-COP and the TPR region of ${varepsilon}$-COP were not essential but required for the enhancement of the interaction. These results indicate that the interaction mode between ${alpha}$-COP and ${varepsilon}$-COP of COPI vesicle is evolutionarily well conserved in eukaryotes.
