Leuconostoc mesenteroides 에서 추출한 glucose 6-phosphate dehydrogenase를 Cibacron Blue F3GA-Sepharose 4B 어피니티 크로마토그라피와 하이드록시 아파타이트 크로마토그라피 방법에 의해 신속하고 경제적으로 순수 분리하였다. 배양한 세포를 초음파로 파괴하여 얻은 조효소액을 Blue-Sepharose에 어피니티 크로마토그라피한 결과 단순히 KCI gradient만을 사용해서는 glucose-6-phosphate dehydrogenase와 함께 lactate dehydrogenase가 혼합된 부분 정제밖에 얻을 수가 없었다. 그러나 이 두 효소는 다음 단계인 하이드록시 아파타이트 크로마토그라피에 의해 완전히 분리되어 순수한 glucose-6-phosphate dehydrogenase를 얻었다. 이렇게 하여 얻은 glucose-6-phosphate dehydrogenase는 polyacrylamide겔 전기 영동파 SDS겔 전기영동에 의해 그 순수함이 증명되었다. 본 실험을 위해 합성 사용한 Blue-Sepharose 겔의 Cibacron Blue F3G-A 치환도는 건조시킨 겔 1 ml에 대해 $105.94;{mu}mole$, 충진된 겔 1 g에 대해 $2.27;{mu}mole$을 보여 주었다. 당체가 효소를 결합할 수 있는 능력은 충진 겔 1 ml에 대해 14.9 U이었다. Blue-Sepharose와 유사한 물질인 Blue Dextran 2,000은 효소에 대해 $NAD^+$와 경쟁적 저해 현상을 보였으며 저해상수는 $0.98;{mu}M$ 이었다.
Using the combination procedure of Cibacron Blue F3G-A Sepharose 4B affinity chromatography and hydroxyapatite chromatography, glucose-6-phosphate dehydrogenase from Leuconostoc mesenteroides was purified rapidly and inexpensively from crude extract of the cell. The Blue-Sepharose affinity chromatography could not separate the two enzymes, glucose-6-phosphate dehydrogenase and lactic dehydrogenase with application of a simple KCl salt gradient. These two enzymes were, however, resolved by the following hydroxyapatite chromatography. The purified enzyme was proved to be homogeneous by polyacrylamide disc gel electrophoresis and SDS gel electrophoresis. The synthesized Blue-Sepharose adsorbent showed dye substitution of $105.94;{mu}mole/g$ dry gel of $2.27;{mu}mole/ml$ packed gel. The binding capcity of glucose-6-phosphate dehydrogenase was 14.9 U/ml packed gel. Blue Dextran 2,000 an analogue of Blue-Sepharose, inhibited the enzyme competitively with respect to $NAD^+$ and the inhibition constant was determined to be $0.98;{mu}M$.
