쥐 뇌 microsome의 cholesterol ester hydrlase를 좋은 안정성과 수득율로 용해 시켰다. 최적 용해는 0.75%의 Triton X-100을 포함하는 pH7.6의 TrisHCl 완충액 1 ml당 10 mg의 microsome을 섞어 균질화하고 고속원심분리하여 이루어졌다. 이렇게 용해된 효소는 mlcrosom에 부착되었을 때 보다 더 외부에서 넣어준 지방질에 의해 그 활성도가 좌우됐으며 반응에 필요한 Triton X-100 농도는 크게 줄어 들었다. Triton X-100, 기질 및 효소의 농도를 독립적으로 변화시키면서 한 일련의 실험으로, 이 효소에 대한 계면활성제의 활성화 효과는 계면활성제의 효소에 대한 비가 계면활성제의 기질에 대한 비보다 더 중요하다는 것을 알 수 있었다. 관찰된 계면활성제의 역할은 계면활성제 존재하에서 이 효소의 반응속도론적 경향을 평가하는데 도움이 된다.
Microsomal cholesterol ester hydrolase of rat brain has been solubilized with good yield and stability. The optimal solubilization was achieved by homogenization and high speed centrifugation of microsomes at 10 mg dry weight/ml of Tris-HCl buffer, pH 7.6, containing 0.75% Triton X-100. The solubilized enzyme was more dependent on exogenous lipid for activity than the microsome-bound enzyme, but the optimal concentration of Triton X-100 was greatly reduced. Series of experiments, in with concentrations of Triton X-100, the substrate, and the solubilized enzyme were varied independently, suggested that the activation effect of the detergent depended more on the ratio of detergent to enzyme than on the ratio of detergent to substrate. The observed role of detergent is helpful to evaluate the kinetic behavior of the enzyme in the presence of detergent.
