인시목 곤충에 독성을 나타내는 B. thuringiensis subsp. kurstaki HD-73의 독소유전자를 함유하고 있는 3.7 Kb NdeI fragment (민 등 1986, 한국생화학회지 19, 363)를 강한 promoter, Ptac을 함유하고 있는 대장균 발현 벡터 pDR 540에 삽입하였다 (pDR 540-cp). Plasmid pDR 540-cp에 존재하는 독소유전자는 tac promoter에 의하여 발현이 되며 동시에 inducer (IPTG) 에 의하여 단백질생성이 조절된다. 적절한 조건하에서 독소단백질이 E. coli 전체 단백질의 20-30%까지 생성이 되는데 이 단백질 (130-Kdal)은 매우 안정되었고 약 24시간 induction 후에는 대부분의 E. Coli가 inclusion body를 형성하였으며, 독소단백질이 inclusion body안에 존재함을 SDS-PAGE와 bioassay로써 확인하였다.
A 3.7 kb NdeI fragment (Min et al., 1986, Korean Biochem. J. 19, 363) carrying the insecticidal crystal protein gene of B. thuringiensis subsp. kurstaki HD-73 was recloned under the tac promoter in pDR540, the E. coli expression vector. The 130-Kdal crystal protein expressed in E. coli was very stable and amounted to about 30% of the total cellular protein under optimal conditions, and most of them are contained in the inclusion body.
