외래 유전자를 도입함으로써 식물체에 새로운 유전정보를 부여하려는 노력이 다각적으로 수행되어 왔으며 최근에는 넓은 숙주범위를 갖는 Ti plasmid를 vector로 이용한 외래 유전자의 도입이 활발히 진행되고 있다. 본 연구에서는 Ti plasmid vector의 일종인 pGA658을 이용하여 광합성 조절 등 여러가지 기능을 갖고 있는 것으로 알려져 있는 thioredoxin 유전자를 식물체내로 도입하여 식물체내에서의 그 역할을 조사할 목적으로 DNA 재조합을 시도하였다. E. coli thioredoxin 유전자를 함유하는 pCJF 4의 Hind III-BamHI DNA fragment를 pGA658의 Hind III-Bgl II site에 삽입시키고 E. coli에 transformation 한 후 형질전환체의 확인은 항생물질 marker에 대한 저항성으로, 재조합 DNA의 유전자 지도는 여러가지 제한효소를 이용한 절편의 크기 확인으로, 그리고 도입 유전자의 발현은 효소 활성 측정에 의 하여 확인하였다. 이렇게 확인된 재조합된 plasmid pKDB3를 담배세포로 도입하기 위한 전 단계로서 freeze-thaw 방법으로 Agrobacterium에 transformation 한 후 항생물질 저항성과 제한효소를 이용한 절편의 크기 확인 및 효소 활성 측정에 의하여 pKDB3가 도입되어 안정하게 유지됨을 확인할 수 있었다.
In this part of study on the incorporation of foreign gene into plant cells, a derivative of Ti plasmid vector (pGA658), containing E. coli thioredoxin gene, was prepared and introduced into Agrobacterium tumefaciens. A recombinant plasmid, pKDB3, was constructed by transferring HindlII-BamHI DNA fragment of pCJF4, including E. coli thioredoxin gene, into HindIII-BglII restriction sites of plasmid pGA658. By doing this, E. coli thioredoxin gene is expected to express from nos promoter of pGA658 after the incorporation into plant cells. The structure of DNAs isolated from kanamycin-resistant E. coli transformants was convinced by restriction mapping. As a preceding step before incorporation into plant cells, the recombinant plasmid pKDB3 was transformed into A. tumefaciens by freeze-thaw procedure. In Agrobacterium transformants, the expression of E. coli thioredoxin gene was positively observed, and this suggested the stable existence of the E. coli gene.
