본 연구에서는 E. coli thioredoxin 유전자를 함유하고 있는 재조합된 plasmid pKDB3의 담배세포내로의 도입을 시도하고, 도입된 thioredoxin 유전자의 발현을 조사하였다. 담배(Nicotina tabacum cv Xanthi) 세포로의 재조합 plasmid pKDB3의 도입은 담배잎 절편과 재조합 DNA 및 helper Ti plasmid pTiBo 542를 함유하고 있는 Agrobacterium tumefaciens strain A281과의 cocultivation 방법을 이용하여 행하여졌으며, 형질전환된 담배세포는 항생물질 저항성 배지에서의 callus 형성 여부로 선별되었고, 선별된 형질전환된 calli는 shoot와 root 형성을 위해 적절한 MS agar 배지에서 계속 키워졌다. 이와 같이 형질전환된 담배세포에서 완전한 식물체로 재생된 담배잎에서의 E. coli thioredoxin 유전자의 발현을 조사한 결과 thioredoxin 활성이 형질전환된 담배세포가 정상세포에 비해 9배 정도 더 큰 것으로 나타났다. 이러한 일련의 결과들은 E. coli thioredoxin 유전자가 성공적으로 담배세포에 들어가서 높은 수준으로 발현됨을 보여주고 있다.
This study was performed to observe the expression of E. coli thioredoxin gene incorporated in tobacco cells. The recombinant DNA used, pKDB3, had been constructed from a Ti plasmid vector pGA658 and a bacterial plasmid pCJF4 harboring E. coli thioredoxin gene, as described in the preceding paper (Lee et al., 1988). The leaf discs of plant (N. tabacum cv Xanthi) were transformed to kanamycin resistance by the cocultivation with Agrobacterium A281 containing plasmid pKDB3. Transformed leaf discs were cultured in MS agar medium with kanamycin for callus induction. Kanamycin-resistant tobacco calli were continuously grown in MS agar medium for shoot induction, and then in MS agar medium for root induction. Expression of E. coli thioredoxin gene in the plant tissue regenerated from transformed tobacco cells was confirmed by DTNB assay. The thioredoxin activity of transformed tobacco cells was much higher (about 9 times) than that of normal tobacco cells. Our results suggest that E. coli thioredoxin gene was successfully incorporated into tobacco cells, and the incorporated bacterial gene could be expressed at a high level.
