- 파아지 T7 전사종결제에 의한 파아지 SP6와 T7 RNA 중합효소의 전사종결반응
- ㆍ 저자명
- 김성준,강창원,Kim. Sung-Joon,Kang. Chang-Won
- ㆍ 간행물명
- 한국생화학회지
- ㆍ 권/호정보
- 1988년|21권 4호|pp.389-395 (7 pages)
- ㆍ 발행정보
- 생화학분자생물학회
- ㆍ 파일정보
- 정기간행물| PDF텍스트
- ㆍ 주제분야
- 기타
파아지 T7 genome에서 비교적 강력한 T7RNA 중합효소의 전사종결제로 알려진$T{phi}$의 전사종결효율에 대해서 연구하였다. 또한 T7 RNA 중합효소와 분자생물학적 특성이 유사한 파아지 SP6 RNA 중합효소에 대한 종결능력 여부를 조사하였다. 우선, 종결제 $T{phi}$가 클론된 플라스미드 pET-3로부터 SP6와 T7 RNA 중합효소의 전사촉진제가 서로 마주보고 있는 플라스미드 pGEM3Z로 $T{phi}$를 옮겼다. 전사종결효율을 정량적으로 측정하기 위하여 [${alpha}-^{32}P$]rNTP를 사용하여 생체 외 전사반응을 통해 전사체에 방사능을 부여하였다. 그리고 종결제 아랫부분을 제한효소로 절단하여 전사시킴으로써 얻어지는 run-off 전사체의 양과 종결제에 의해 종결된 전사체의 양을 비교하였다. T7 RNA 중합효소의 전사는 pET-3에 있는 $T{phi}$에 의해서 78%가 종결되는 반면, pGEM3Z에 삽입된 $T{phi}$에 의해서는 38% 밖에 종결되지 않았다. 이는 종결제 이외의 DNA 염기열이 전사종결에 영향을 마치는 것을 시사한다. 또한, SP6 RNA 중합효소의 전사도 pGEM3Z에 삽입된 $T{phi}$에 의해서 81%가 종결되었다. 이는 두 파아지 중합효소의 전사종결기작이 유사함을 시사한다.
Transcription termination efficiencies of a phage T7 terminator $T{phi}$ for the T7 and SP6 RNA polymerases were studied. The terminator $T{phi}$ cloned in the plasmid pET-3 was subcloned into the plasmid pGEM3Z which contains both SP6 and T7 RNA polymerase promoters facing each other. Amounts of transcripts terminated at $T{phi}$ were compared with amounts of read-through transcripts run off at a restriction site. For quantitative analysis the transcripts were labeled with [${alpha}-^{32}P$]rNTP in in vitro transcription reaction. Transcription of T7 RNA polymerase terminates with efficiency of 78% by the $T{phi}$ in the pET-3, but terminates with efficiency of 38% by the $T{phi}$ in the pGEM3Z. It suggests that DNA sequences other than the terminator sequence affect the termination efficiency. Interestingly, the $T{phi}$ shows 81% termination efficiency for the SP6 RNA polymerase. Now this becomes the first strong terminator discovered for the SP6 RNA polymerase. This also suggests that both phage RNA polymerases might share similar mechanism of transcription termination.