유전자 재조합 인간 Interferon-${eta}$를 초음파 처리, 8 M Guanidine-HCl 추출, inclusion body의 용해, 희석, Blue Sepharose CL-6B column chromatography, HPLC gel filtration 방법 등을 이용하여 대장균으로부터 정제하였다. 정제된 IFN-${eta}$의 specific activity는 $3.1{ imes}10^8$ IU/mg이었고 정제도는 1,902이었다. 정제된 IFN-${eta}$는 환원된 상태와 환원되지 않은 상태에서 SDS polyacrylamide gel electrophoresis 한 결과 모두 단일 띠로 나타났으며 분자량은 18,000 dalton이었다. N-말단 아미노산을 조사한 결과 재조합 인간 IFN-${eta}$는 천연형 인간IFN-${eta}$와 같이 N-말단이 methionine임이 밝혀졌다. 전자 현미경을 이용하여 inclusion body 형성을 조사한 결과 IFN-${eta}$ 유전자를 가지고 있는 대장균에서는 inclusion body의 형성을 확인할 수 있었으나 숙주(wild type)에서는 확인되지 않았다. 최종적으로 정제된 IFN-${eta}$의 정제도는 HPLC gel filtration 한 결과 99% 이상으로 나타났다.
Recombinant human interferon-${eta}$ was purified to homogeneity from E. coli by methods of sonication, extraction with 8 M Guanidine HCl, solubilization of inclusion body, dilution, Blue Sepharose CL-6B column chromatography and HPLC gel filtration. Specific activity of purified IFN-${eta}$ was $3.1{ imes}10^8$ IU/mg protein and the purification was 1,902 fold. The purified IFN-${eta}$ was a single band on SDS polyacrylamide gel electrophoresis under reducing condition and non-reducing condition and its molecular weight was estimated to 18,000 dalton. The results of N-terminal analysis showed that recombinant human IFN-${eta}$ has N-terminal methionine same as natural human IFN-${eta}$. The inclusion bodies were observed in the E. coli cells harboring IFN-${eta}$ gene but not observed in the host cells (MM 294). The purity of finally purified IFN-${eta}$ was more than 99% by HPLC gel filtration.
