Gluconobacter melanogenus의 세포질과 세포막으로부터 NAD(P) 비요구성 폴리올 탈수소 효소를 분리하여 순차적으로 CM-셀롤로오즈의 통과, 풀리에칠렌 글리콜 침전, DEAE-Sephacel 컬럼의 통과, SP-5 PW 컬럼을 이용한 HPLC를 행하여 정제하였다. 정제된 효소는 소단위의 구조, 흡수 스펙트럼이 서로 같았고 기질특이성은 유사하였다. 이 효소는 시토크륨 C특유의 552, 522, 418 nm에서 흡수 피크를 갖는 흡수 스펙트럼을 보였다. 효소 중의 산화된 시토크롬 성분은 기질인 만니톨에 의하여 빠르게 환원되었다. 두 효소는 모두가 SDS-전기영동에 의하여 분자량이 63 K, 52 K, 20.5 K인 소단위로 구성되어 있음을 보였다. 그 중에서 분자량이 52 K인 소단위가 산화된 시토크롬 C와 같은 흡수 스펙트럼을 나타냈다. 이 효소는 제한된 기질특이성을 보였는데 D-lyxo 구조를 갖는 기질인 만니톨이나 솔비톨에 대하여만 효소활성을 보였으며 특히 만니톨에 대한 활성도가 컸다.
From cytoplasm and cell membrane of Gluconobacter melanogenus NAD(P) independent polyol dehydrogenases were purified by polyethylene glycol precipitation, conventional CM-cellulose and DEAE-Sephacel column, and HPLC SP column chromatography. The two enzymes gave same subunit structure, same absorption spectrum, and similar substrate specificity. The enzyme showed a characteristic absorption spectrum of cytochrome c showing maxima at 552, 522, and 418 nm. The oxidized cytochrome component of the enzyme was rapidly reduced by a substrate, D-mannitol. Based on SDS-PAGE, the purified enzyme was composed of three different subunits having Mr of 63 K, 52 K and 20.5 K, respectively. The second subunit (Mr 52 K) showed oxidized cytochrome c absorption spectrum. The enzyme had a restricted substrate specificity toward the polyols having D-lyxo configuration like D-mannitol and D-sorbitol showing higher activity on D-mannitol.
