수소발생효소의 활성이 결핍된 일련의 대장균 돌연변이체를 얻었다. 그 중에, HD24, 43 그리고 50의 세 돌연변이체는 전에 보고되었던 plasmid, pHY1에 의해 보완되었다. 다른 돌연변이체인 HD6를 대장균 염색체 DNA library로 형질변환 시킨 후, 이 돌연변이체의 수소발생효소 활성을 회복시키는 plasmid, pHY3를 얻었다. 이 plasmid는, 그 insert의 각 fragment를 이용한 보완실험에 의해, 수소 발생효소에 필수적인 두 개의 유전자를 갖고 있는 것으로 밝혀졌다. 그 두 유전자는 2.1 kb인 SalI-fragment에 포함되어 있었다. 또한 이 조각은 그 자체의 promoter를 갖고 있는 것으로 생각되며, tac promoter의 조절하에 형질발현 시켰을 때, 그 분자량이 각각 31과 43 kDa인 두 폴리펩티드를 만들었고, 그 세포내 함량은 대략 10퍼센트 정도였다. 그러나, 그 두 폴리펩티드의 양의 증가로 인해 수소발생효소 활성이 증가하지는 않는 것으로 보아, 그들은 효소활성에 필수적이기는 하나, 충분하지는 않은 것으로 생각된다.
A set of hydrogenase-defective E. coli mutant strains have been isolated. Among them, three mutants, E. coli HD24, 43, and 50, were complemented with pHY1 previously reported (Oh et al., 1987). Another mutant strain, HD6, was transformed with E. coli chromosomal DNA library and a plasmid, pHY3, was isolated which restored hydrogenase activity in this strain. This plasmid was proved to contain two genes essential for hydrogenase activity by the complementation test of various mutants with each fragment of the insert. The two genes are contained in 2.1 kb SalI fragment of pHY3-insert. It seems that this fragment also has its own promoter. When it was expressed under the control of tac promoter, it gave two polypeptides of molecular masses, 31 and 43 kDa with a cellular content of about 10 percent. However, their increase did not correlated with the increase of hydrogenase activity. That is, they are essential components for hydrogenase activity but not sufficient.
