매미나방 종령유충에서 유약호르몬 에스테라제와 더불어 유약호르몬을 조절하는 유약호르몬 에폭시드 가수분해 효소를 확인하였다. 이들의 효소 활성을 측정하기 위하여 유약호르몬 III를 기질로 분획분석방법 (partition assay)을 사용하였다 유약호르몬 에스테라제의 저해제는 3-octylthio-1,1,1,-trifluoro-2-propanone(OTFP)을 이용하였고, 유약호르몬 기질과 함께 배양하여 가수분해되지 않은 유약호르몬은 isooctane 층에, 분해산물인 유약호르몬 acid, diol 그리고 diol-acid는 물층으로 분획되어 유약호르몬의 대사산물을 측정하였다. 조직별 유약호르몬 에폭시드 가수분해 효소의 활성 측정을 위해 혈림프, 지방체, 중장, 체벽을 분리하였고, 또한 세포 소분획별로는 세포질, 핵, 미토콘드리아, 마이크로솜을 각각 분리하여 비교하였다. 그 결과 조직별로는 혈림프의 JHEH가 거의 측정되지 않았고 지방체에서 가장 높게 나타났다. 세포 소분획에서는 마이크로솜에서 약 53%이상의 상대적 활성을 나타내었다. 마이크로솜의 유약호르몬 에폭시드 가수분해 효소를 정제하기 위해 DEAE-sephacel, sephacryl S-200, hydroxylapatite column등 칼럼 크로마토그래피법을 이용하여 약 190배의 활성을 가진 JHEH fraction을 얻었다.
Juvenile hormone epoxide hydrolase (JHEH), which may play a pivotal role In regulating insect juvenile hormone (JH) titer along with JH esterase, was identified in Gypsy moth, Lymontria dispar. A partition assay was developed to measure insect ,JH III metabolism in biological samples containing both JH esterase and JHEH activity. The assay utilizes commercially available radiochain［$^$3/H] -labeled JH as substrate and the selective JH esterase inhibitor 3-octylthio -1,1,1,-trifluoro-2-propanone (OTFP). JH partitions into an isooctane phase and the metabolites JH acid, JH diol and JH diol-acid into aqueous methanol after incubation of JH substrate with inhibited and uninhibited sample. In vitro metabolism of JH III (5${ imes}$10$^$-4/ M) was measured in haemolymph, fat body, midgut and integument homoginates. And also that was measured in different subcellular fraction (cytosol, nuclear, mitochondria, microsome). Microsomal protein was co-purified 190-fold with the JHEH activity through DEAE-sephacel, sephacryl S-200 and hydroxylapatite columns.
