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Transglutaminase를 생산하는 Streptomyces platensis의 분자생물학적인 연구를 위한 접합 전달법 확립
배세점, 조양호, 최선욱, Bae. Se-Joung, Jo. Yang-Ho, Choi. Sun-Uk 한국생명과학회 생명과학회지 6 Pages
한국생명과학회 생명과학회지 2010, Vol.20 No.1 97-102 (6 pages)
산업적인 가치가 매우 높은 TGase를 생산하는 S. platensis YK-2의 분자 유전학적인 연구를 위해 형질전환방법을 확립하였으며 본 연구를 위해 도입된 방법은 대장균을 plasmid DNA의 공여체로, S. platensis의 포자를 수용체로 사용하는 접합전달법이다. S. platensis를 위한 최적 접합전달조건은 50 mM의 $MgCl_2$를 첨가한 MS배지에 열처리를 하지 않은 포자와 $5{ imes}10^7$의 plasmid DNA 공여체인 E. coli를 사용하는 것이다. 또 본 연구를 통해 얻어진 접합전달체의 attB site에 대한 분석을 통해 S. platensis chromosome의 piri... -
에폭사이드 가수분해효소 유전자의 double expression cassette 재조합 Pichia pastoris를 이용한 enantiopure styrene oxide의 제조
김희숙, Kim. Hee-Sook 한국생명과학회 생명과학회지 7 Pages
한국생명과학회 생명과학회지 2008, Vol.18 No.1 136-142 (7 pages)
styrene oxide 혼합물로부터 고순도 광학활성 (S)-styrene oxide를 제조하는데 사용하였다. 본 연구에서 사용된 R. glutinis EH 유전자는 전보에서 사용한 pPICZ B/RgEH plasmid DNA를 주형으로 하여 얻었으며 PCR 방법으로 BglII 제한자리를 돌연변이 시키고 AOX1 promoter $(P_{AOX1})$-RgEH 유전자-전사종결서열($TT_{AOX1}$)을 이중으로 가진 이중발현 cassette를 만들어 P. pastoris의 염색체 DNA에 삽입시켰다. 반응온도를 $30^{circ}C$로 하였을 때, RgEH를 이중발현 cassette로 발현시킨 재조합균주 P. pastoris의 (R)-styrene... -
Bacillus sp. J105 유래 β-lactamase 유전자의 cloning 및 E. coli 내에서의 발현 분석
강원대, 임학섭, 서민정, 김민정, 이혜현, 조경순, 강병원, 서권일, 최영현, 정영기, Kang. Won-Dae, Lim. Hak-Seo, Seo. Min-Jeong, Kim. Min-Jeong, Lee. Hye-Hyeon, Cho. Kyeong-Soon 한국생명과학회 생명과학회지 8 Pages
한국생명과학회 생명과학회지 2008, Vol.18 No.11 1592-1599 (8 pages)
이 recombinant plasmid ($eta$-lac+)를 pACYC184 (4.2kb) vector를 사용하여 subcloning 하여 최종 $eta$-lactamase의 활성이 있는 6.4 kb 단편이 포함된 pKL11${Delta}4.6$을 제작하였다. 이 단편을 DNA 염기서열을 분석한 결과 309개의 아미노산으로 구성된 $eta$-lactamase를 코딩하는 927 bp를 포함하고 있었다. 클로닝된 $eta$-lactamase 유전자의 upstream을 포함하는 170 bp의 염기서열을 분석한 결과, B. thuringinesis와 B. cereus 유래의 $eta$-lactamase 유전자의 upstream 부위와 97%의 일치를 보였다. 본 연구에서... -
Saccharomyces cerevisiae에서 GAL 10 promoter와 exoinulinase 분비 서열을 이용한 Clostridium endoglucanase A의 과발현·분비
임명예, 이진우, 이재형, 김연희, 서진호, 남수완, Lim. Myung-Ye, Lee. Jin-Woo, Lee. Jae-Hyung, Kim. Yeon-Hee, Seo. Jin-Ho, Nam. Soo-Wan 한국생명과학회 생명과학회지 7 Pages
한국생명과학회 생명과학회지 2007, Vol.17 No.9 1248-1254 (7 pages)
과 INU1 분비 서열을 가지는 pYInu-CT1, 두개의 plasmid는 S. cer-evisiae SEY2102와 S. cerevisiae 2805에 각각 형질전환시켜 ur-acil이 결핍된 배지에서 선별하였다. celA gene 자체 분비 서열보다 INU1 분비 서열을 사용했을 때 발현량과 분비효율은 각각 약 $18{sim}22%$ 와 11% 향상되었다. 이 중 361 unit/l의 발현율과 89%의 plasmid 안정성, 그리고 70%의 분비효율을 보인 S. cerevisiae 2805/pYinu-CT1 효모 형질전환체를 cellolose를 효과적으로 분해하는 재조합 효모 생균체로 선별하였다. Galactose 배지내에서 S. cerevisiae... -
Expression of Yippee-Like 5 (YPEL5) Gene During Activation of Human Peripheral T Lymphocytes by Immobilized Anti-CD3
전도연, 박혜원, 김영호, Jun. Do-Youn, Park. Hye-Won, Kim. Young-Ho 한국생명과학회 생명과학회지 8 Pages
한국생명과학회 생명과학회지 2007, Vol.17 No.12 1641-1648 (8 pages)
transfection하여 발현시킨 결과, GFP-YPEL5 단백질이 모두 핵에 위치하는 것으로 나타나 YPEL5 단백질이 핵단백질임을 확인하였다. 또한 YPEL5의 기능을 규명하기 위해 YPEL5 발현벡터를 HeLa 세포에 transfection 하고 발현시켜 HeLa 세포의 증식에 미치는 YPEL5의 영향을 MTT assay로 분석한 결과, vector plasmid를 transfection시킨 대조구의 47% 수준으로 세포증식이 감소하는 것으로 나타났다. 이러한 결과들은 YPEL5 mRNA의 발현이 T 세포 수용체를 통한 T 세포 활성화의 초기단계에 현저히 감소됨을 보여주며, 또한 YPEL5가... -
Rhodotorula glutinis의 epoxide hydrolase 고효율 발현 유전자 재조합 Escherichia coli 생촉매 개발
이수정, 김희숙, Lee. Soo-Jung, Kim. Hee-Sook 한국생명과학회 생명과학회지 5 Pages
한국생명과학회 생명과학회지 2006, Vol.16 No.3 415-419 (5 pages)
고려하여 E. coli 에서 잘 사용되지 않는 rare codon에 대한 tRNA유전자정보가 들어 있는 pRARE plasmid를 함유한 E. coli 균주인 Rosetta(DE3)pLysS를 숙주세포로 사용하였다. R. glutinis EH를 발현시킨 재조합 E. coli를 생촉매로 사용하여 라세믹 styrene oxide 혼합물과 반응시켰을 때, (R)-styrene oxide에 대한 입체선택적 가수분해활성이 wild type R. glutinis 대비 매우 향상됨을 관찰할 수 있었다. 또한 라세믹 기질로부터 입체적으로 고순도인 99% ee 값을 갖는 광학적으로 순수한 (S)-styrene oxide를 얻을 수 있었다. -
효모의 미토콘드리아 형질전환을 통한 인위적인 operon 형식의 유전자 발현 규명
김경민, 설일환, Kim. Kyung-Min, Sul. Il-Whan 한국생명과학회 생명과학회지 4 Pages
한국생명과학회 생명과학회지 2006, Vol.16 No.3 365-368 (4 pages)
실험에서는 식물의 유용유전자를 개발하여 그 발현양상을 확인하기 위하여 효모를 이용하면 그 발현양상을 비교적 빠르게 확인할 수 있는 미토콘드리아 형질전환 방법을 규명하였다. 또한 미토콘드리아(mt)에 관련된 유전자를 TPI promoter를 가진 plasmid에 재조합한 후 효모에 형질전환하여 mt에서 그 유전자의 특성이 발현 되는 것을 확인하였다. 따라서 본 연구의 결과로 mt에 관련된 유전자를 식물의 조직에 형질전환 하여 1개 이상의 유전자가 식물의 mt에 삽입되어 그 유전자의 특성이 발현되는데 이용되어 질수 있을 것이라... -
Regulation of Photosynthesis Genes (puf, puc, puhA, bchC, bchE, bchF, and bchI) in Rhodobacter sphaeroides
고인정, 김용진, 이진목, 신선주, 오정일, Ko. In-Jeong, Kim. Yong-Jin, Lee. Jin-Mok, Shin. Sun-Joo, Oh. Jeong-Il 한국생명과학회 생명과학회지 8 Pages
한국생명과학회 생명과학회지 2006, Vol.16 No.4 632-639 (8 pages)
본 연구에서는 lacZ transcriptional fusion plasmid를 이용하여 광합성 세균인 Rhodobacter sphaeroides에서의 7가지 광합성유전자 (puf, puc, puhA, bchC, bchE, bchF, bchI) 발현의 경향과 조절을 조사하였다. R. sphaeroides에서 puhA와 bchI를 제외한 모든 광합성유전자들이 호기적 조건과 비교했을 때 혐기적 조건에서 더욱 강하게 발현되었다. puhA 유전자는 bchFNBHLM-RSP0290과 operon을 형성하며, bchI 유전자는 crtA와 operon을 이루는 것으로 나타났다. 광합성 조건에서 자란 R. sphaeroides의 puf, puc, bchCXYZ operon의... -
Zebrafish 동물모델에서 human HtrA2의 expression system 정립에 관한 연구
조성원, 박효진, 김구영, 남민경, 김호영, 고인호, 김철희, 임향숙, Cho. Sung-Won, Park. Hyo-Jin, Kim. Goo-Young, Nam. Min-Kyung, Kim. Ho-Young, Ko. In-Ho, Kim. Cheol-Hee 한국생명과학회 생명과학회지 8 Pages
한국생명과학회 생명과학회지 2006, Vol.16 No.4 571-578 (8 pages)
동물모델을 선택하여 hHtrA2의 발현 시스템을 정립하였다. 먼저 zebrafish에 hHtrA2를 발현시키기 위하여 zebrafish에서 일반적으로 사용되는 발현 시스템인 pCS2+ vector에 hHtrA2와 GFP를 cloning하고 plasmid를 HEK293 cell에 transfection한 후, hHtrA2-GFP fusion 단백질의 발현을 immunoblot과 immunofluorescence staining assay로 확인한 바 약 64 kDa의 hHtrA2 단백질의 발현을 확인할 수 있었다. Zebrafish에서 hHtrA2-GFP fusion 단백질의 발현양상은 immunofluorescence microscope으로 확인하였다. hHtrA2-GFP DNA와 mRNA를... -
Saccharomyces cerevisiae에서 Bacillus CGTase의 표층발현
김현철, 임채권, 김병우, 전숭종, 남수완, Kim. Hyun-Chul, Lim. Chae-Kwon, Kim. Byung-Woo, Jeon. Sung-Jong, Nam. Soo-Wan 한국생명과학회 생명과학회지 6 Pages
한국생명과학회 생명과학회지 2005, Vol.15 No.1 118-123 (6 pages)
선별된 형질전환체들을 YPGS배지에서 배양 후 활성 염색을 통하여 CD가 생 성 됨을 확인하였다. 배양시간과 효소반응시간에 따른 반응 산물을 TLC로 분석 한 결과, 배양 12시간째부터 효소활성이 나타났고, 반응 10분 이후부터 CD가 생성되어 시간이 지남에 따라 CD 생성양이 증가하는 것을 확인하였다. 회분 배양한 결과 $25^{circ}C$와 $30^{circ}C$에서 CGTase의 최대 활성이 각각 21.3 unit/1 와 16.5 unit/1로 나타났고, plasmid 안정성은 각각 $86\%$와 $82\%$로 나타나 배양온도에 상관없이 plasmid는 비교적 안정하게 유지되었다.