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Saccharomyces cerevisiae에서 인체 Lipocortin-1의 유전자 발현 및 분비
손정훈, 나도선, 이상기, Sohn. Jung-Hoon, Na. Doe-Sun, Rhee. Sang-Ki 생화학분자생물학회 한국생화학회지 8 Pages
생화학분자생물학회 한국생화학회지 1991, Vol.24 No.5 453-460 (8 pages)
발현을 조사한 결과 각 promoter의 강도 및 사용한 plasmid의 copy수에 따라 발현효율이 달라져 GALl-GALlO promoter와 $2{mu}m$ 기원의 multicopy수의 plasmid를 사용했을 경우 인체 lipocortin-1 유전자의 발현효율이 가장 높음이 확인되었다. 효모 내에서 생산된 인체 lipocortin을 배지로 분비시키기 위해 효모의 ${alpha}$ 교배인자의 pre-pro leader 배열과 인체 lipocortin-1 유전자를 융합시킨 결과 효율적인 post-translational processing을 거쳐 인체 lipocortin만이 일부 분해된 상태로서 체외로 분비됨이 관찰되었다. -
대장균 수소발생효소 유전자의 클로닝과 형질발현
최석정, 양철학, Choi. Suk-Jung, Yang. Chul-Hak 생화학분자생물학회 한국생화학회지 6 Pages
생화학분자생물학회 한국생화학회지 1990, Vol.23 No.3 402-407 (6 pages)
이 돌연변이체의 수소발생효소 활성을 회복시키는 plasmid, pHY3를 얻었다. 이 plasmid는, 그 insert의 각 fragment를 이용한 보완실험에 의해, 수소 발생효소에 필수적인 두 개의 유전자를 갖고 있는 것으로 밝혀졌다. 그 두 유전자는 2.1 kb인 SalI-fragment에 포함되어 있었다. 또한 이 조각은 그 자체의 promoter를 갖고 있는 것으로 생각되며, tac promoter의 조절하에 형질발현 시켰을 때, 그 분자량이 각각 31과 43 kDa인 두 폴리펩티드를 만들었고, 그 세포내 함량은 대략 10퍼센트 정도였다. 그러나, 그 두 폴리펩티드의 양의... -
Klebsiella pneumoniae로부터 nifA Gene의 크로닝 및 Azospirillum에서의 발현
조무제, 정명철, 강규영, 갈상완, Cho. Moo-Je, Chung. Myung-Chul, Kang. Kyu-Young, Gal. Sang-Wan 생화학분자생물학회 한국생화학회지 7 Pages
생화학분자생물학회 한국생화학회지 1989, Vol.22 No.3 269-275 (7 pages)
nifA 유전자를 크로닝하여 Azospirillum에 도입 발현시킴으로서 암모니아 비제어 질소고정을 유도하고자 하였다. Azospirillum 숙주에서 안정하게 복제 유지될 수 있는 vector로서 RK2 (IncP-1 group plasmid) 변형 vector인 pRK290과 pVK100를 선별하였으며 pKT230 (RSF1010 변형 vector, IncQ group) 및 pSa151(pSa 변형 vector, IncW group)는 불안정하였다. nifA 유전자 크로닝은 nifA 3.0 kb Sal1 절편을 pRK290의 Bgl II 위치에 그리고 pVK100의 Xho1 위치에 각각 크로닝하고 pMK23 및 pMK26으로 명명하였다. pMK23에서 nifA의 발현... -
Tac promoter를 이용한 Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD-73 독소유전자의 E.coli내에서의 발현증대
민소영, 박호용, 김명희, 김정일, Min. So-Young, Park. Ho-Yong, Kim. Myoung-Hee, Kim. Jeong-Il 생화학분자생물학회 한국생화학회지 6 Pages
생화학분자생물학회 한국생화학회지 1988, Vol.21 No.4 372-377 (6 pages)
363)를 강한 promoter, Ptac을 함유하고 있는 대장균 발현 벡터 pDR 540에 삽입하였다 (pDR 540-cp). Plasmid pDR 540-cp에 존재하는 독소유전자는 tac promoter에 의하여 발현이 되며 동시에 inducer (IPTG) 에 의하여 단백질생성이 조절된다. 적절한 조건하에서 독소단백질이 E. coli 전체 단백질의 20-30%까지 생성이 되는데 이 단백질 (130-Kdal)은 매우 안정되었고 약 24시간 induction 후에는 대부분의 E. Coli가 inclusion body를 형성하였으며, 독소단백질이 inclusion body안에 존재함을 SDS-PAGE와 bioassay로써 확인하였다. -
대장균 변이주 내에서 ${lambda}P_L$ Promoter를 갖는 재조합 트립토판 유전자의 발현과 안정성
허태린, 김현수, 이세영, Huh. Tae-Lin, Kim. Ryeon-Soo, Lee. Se-Yong 생화학분자생물학회 한국생화학회지 5 Pages
생화학분자생물학회 한국생화학회지 1987, Vol.20 No.1 98-102 (5 pages)
재조합 플라스미들은 pPLT와 pPLPT 내에 있는 트립토판 유전자(trp)들의 발현과 안정성에 미치는 숙주세포들의 trpR 그리고 tnaA 유전자의 영향에 대하여 조사하였다. 숙주세포가 cI857 유전자를 갖고 있지 않을 경우, ${lambda}P_L$과 함께 trp promoter에 의해 발현되는 재조합 trp 유전자를 갖고 있는 플라스미드 pPLPT는 ${lambda}P_L$ promoter만에 의해서 발현되는 재조합 trp 유전자를 갖고있는 플라스미드 pPLT 보다 트립토판 유전자의 발현정도가 1.5배 이상 높게 나타났으나 플라스미드의 안정성은 오히려 저하되었다. 또한... -
Gypsy transposable element를 사용한 초파리의 억제유전자 $su(s)^2$의 cloning
김재섭, 박영식, 임정빈, Kim. Jae-Seob, Park. Young-Shik, Yim. Jeong-Bin 생화학분자생물학회 한국생화학회지 8 Pages
생화학분자생물학회 한국생화학회지 1987, Vol.20 No.1 29-36 (8 pages)
kb 크기의 DNA sequence를 $su(s)^2$, $pr^{bw}cn$ 초파리로부터 준비하여 pUC9 vector의 Hind III site에 삽입시켜 genomic library를 제조하였다. 재조합 plasmid를 $^{32}p$로 label시킨 gypsy probe를 사용하여 posi ti ve clone을 찾아내고 제한효소로 분석하여 다시 골라내었다. 이 중에서 $su(s)^2$ sequence를 가지는 clone은 최종적으로 Oregon-R $su(s)^2$; $pr^{bw}cn$, $pr^{bw}cn$ 초파리들의 거대염색체에 in situ hybridization시켜 확인하였다. pYDS 2라고 명명된 이 $su(s)^2$ clone의 restriction map을 작성한 결과... -
Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD-73 독소유전자의 cloning 및 E. coli에서의 발현
민소영, 박호용, 김명희, 김정일, Min. So-Young, Park. Ho-Yong, Kim. Myoung-Hee, Kim. Jeong-Il 생화학분자생물학회 한국생화학회지 9 Pages
생화학분자생물학회 한국생화학회지 1986, Vol.19 No.4 363-371 (9 pages)
독소 유전자를 E. coli에 cloning하였다. 먼저 biotin으로 표지된 DNA probe (pC34)로서 전체 plasmid들과 hybridization한 결과, 75 kb plasmid상에 독소유전자가 존재함을 알았다. 75 kb plasmid를 제한효소 BgIII로 절단하여 vector pBR322에 삽입시켜 독소유전자를 포함하는 14.3 kb의 삽입부위를 가지는 clone인 pMK73을 얻었고, 이를 subcloning하여 3.7 kb의 독소유전자만을 포함하는 clone을 얻었다. 이 clone들의 total cell extract들은 흰불나방 유충에 독성을 나타내어 독소유전자의 E. coli에서의 발현을 확인할 수 있었다. -
대장균에서의 인간 Interferon-$gamma$의 cDNA 크로닝 및 발현
고형곤, 현형환, 유무영, 권병세, 주종광, 문홍모, 김광수, Koh. Hyung-Kon, Hyun. Hyung-Hwan, Yoo. Moo-Young, Kwon. Byung-S., Jue. Chong-K., Moon. Hong-Mo, Kim. Kwang 생화학분자생물학회 한국생화학회지 9 Pages
생화학분자생물학회 한국생화학회지 1986, Vol.19 No.3 266-274 (9 pages)
pINIIIA3 vector를 사용하여 IFN-$gamma$를 발현시킬 수 있는 재조합 plasmid ($pKS{gamma}3B$)를 제조하였다. $pKS{gamma}3B$로써 형질 변환된 bacterial cell을 antiviral activity에 의해 역가 분석을 해본 결과, 높은 정도로 IFN-$gamma$를 발현시켰으며 이 IFN-$gamma$는 천연의 IFN-$gamma$에 대하여 특이성이 있는 monoclonal antibody에 의해서도 인지되었다. High copy number를 갖는 expression vector를 제조 (pHK-3) 하였으며, 이 high copy number vector를 사용하므로써 IFN-$gamma$의 생성이 증가되는 사실을 확인하였다. -
$lambda$ Phage의 PL Promoter를 갖는 표현형 유전자 운반체의 개발
이동근, 노현모, Lee. Dong-Kun, Rho. Hyune-Mo 생화학분자생물학회 한국생화학회지 11 Pages
생화학분자생물학회 한국생화학회지 1984, Vol.17 No.2 177-187 (11 pages)
N gene의 일부를 가지므로 fused protein을 얻을 수 있다. 또한 pPL81을 HpaII로 처리하면 PL-promoter와 operator만을 갖는 273 bp가 나오며 이를 cohesive end가 같은 pBR322의 ClaI site에 삽입하였다. PL-promoter가 시계반대방향으로 들어간 것을 pPL83, 시계방향인 것을 pPL84이라 명명 하였으며 이들 plasmid는 EcoRI과 HindIII를 처리하면 PL-promoter만 있는 약 300 bp의 DNA조각을 얻을 수 있다. PL-promoter와 구조 유전자와의 거리에 따른 PL-promoter의 효율을 $eta$-lactamase 효소의 활성도로 조사한 결과 pPL81보다는... -
Purification and Characterization of Pst I Methylase from Providencia stuartii 164
김용석, 노현모, Kim. Yong-Sok, Rho. Hyune-Mo 생화학분자생물학회 한국생화학회지 13 Pages
생화학분자생물학회 한국생화학회지 1984, Vol.17 No.2 107-119 (13 pages)
제한효소로 자른 pBR322 DNA는 분리한 methylase에 의해 methylation이 일어나지 않은 사실과 분리한 methylase로 methylation 시킨 pBR322 DNA는 Pst I 제한효소로 잘라지지 않는다는 사실로 확인되었다. 또한 Pst I restriction-modification 유전자를 가지는 plasmid인 pRL829 DNA가 이 효소에 의해 더 이상 methylation이 일어나지 않은 사실은 분리해 낸 효소가 Pst I methylase임을 확신시켜 주었다. 이 효소는 pH 7.5에 서 가장 높은 활성도를 보여 주었고 50 mM 농도의 NaCl이 있으면 활성도가 증가했다. 또한 Pst I methylase는...